动物行为学的研究方法大全11篇
时间：2024-03-04 14:44:31绪论：写作既是个人情感的抒发，也是对学术真理的探索，欢迎阅读由发表云整理的11篇动物行为学的研究方法范文，希望它们能为您的写作提供参考和启发。
篇（1）
1.1 抗脑卒中药物的评价
一般用运动行为实验对脑栓塞动物模型（如大鼠）进行卒中后运动和协调能力的评价，从而判定药物是否对脑卒中后神经损伤恢复有效。运动整合及协调能力实验主要包括：平衡木实验、转棒实验、肌力实验、网屏实验、肢体对称实验、肢体放置实验、前肢放置检测、平行杠实验、爬绳实验、爬梯实验、前爪伸屈实验、步态分析实验等。然而，大脑尾状核、皮层和纹状区对运动 - 感觉信息的处理和整合起一定作用，这些区域在大脑中动脉梗死后很容易受损，并累及周围区域如肢体的皮层、额叶和颞叶。因此，目前认为缺血损伤后动物模型的神经行为学评价除了评估一般感觉运动功能，还应该将认知实验加入评估中。有证据表明，卒中后认知缺陷可持续超过一般的感觉运动缺陷。认知实验主要包括 Morris 水迷宫、放射状迷宫和 T 迷宫。
脑卒中动物模型在不同时期的行为学表现不同，因此行为学评价抗脑卒中药物，相关行为学指标表现出的敏感性，同时也存在着广泛的偏差，组织学检查结果和行为学实验相关，另一些则无关或相反。因此，当前的评价方法尚不能全面的反映脑卒中的生理病理状态，这就需要对模型生理病理指标与行为学指标相关性进行研究，综合多种方法进行评估，寻找最敏感稳定的行为学指标。
1.2 抗精神病药物的评价
焦虑模型主要分为 2 类：非条件反射模型和条件反射模型。其中比较经典的研究方法基于动物有畏惧空旷场地的天性和其活动具有趋避性而建立的旷场实验、避暗实验、高架十字迷宫和 Vogels 饮水冲突模型。
目前抑郁症行为学评价方法主要包括强迫游泳实验、悬尾实验、空场实验、获得性无助实验、新奇抑制摄食实验、糖水偏爱实验、间断性行为实验、睡眠干扰实验等。其中，动物强迫性游泳和悬尾测试是评价抗抑郁药作用最常用的方法，因其快速、方便、对多种抗抑郁药物有效，被广为接受和应用。然而，也有学者认为动物漂浮既可以是抑郁的表现，也可以是一种适应机制，动物以此节约能量，漂浮更长的时间，以维持更长的存活时间。
由于应激是导致焦虑和抑郁发生的重要原因之一，应激对心理情感、认知功能及反应判断能力等行为活动均产生影响，研究应激致动物行为方法主要有社会交互实验，动物可出现社会逃避及兴趣缺失的抑郁样行为，此外还有动物束缚实验、糖水偏爱实验、条件性防御掩埋实验、听觉惊跳实验等。
1.3 抗衰老药物的评价
神经退行性病变是由于神经元进行性变性死亡导致的以中枢神经系统损害为主的神经系统疾病，与年龄相关的大脑退行性变化是大脑中枢神经系统在生长、发育、成熟之后走向衰老过程中而表现的生物老化的正常生理现象。其最突出的临床表现是记忆和学习能力下降，因此抗衰老药物行为学评价主要考察对学习记忆障碍的作用。主要研究方法包括空间记忆和非空间记忆，在空间学习记忆中，采用 Morris 水迷宫、八臂迷宫、T 型迷宫、辐射式迷宫等方法。近年来新的认知方法出现，可以对空间学习记忆和非空间学习记忆进行测试，如物体认知测试系统，包含新物体的识别、新物置识别以及情景记忆和时序记忆。其中新物体的识别、情景记忆和时序记忆属于空间记忆；新物置识别属于非空间记忆。在条件反射方法中，非条件刺激可以是惩罚性的也可以是奖励性的。使用惩罚性条件刺激的行为检测方法如穿梭、跳台、避暗等已被广泛应用于学习记忆和巩固相关行为研究。但这些方法检测的学习记忆能力大多是基于对环境刺激的被动反应，而且需要给予惩罚性 / 伤害性刺激使动物完成学习记忆，对动物的生理及心理影响较大，同时影响神经递质的释放。而利用奖励物质的奖赏效应，大脑会向负责决策的区域发送奖赏信号，形成好的记忆。奖赏效应能使机体的认知能力进一步提升，形成良性循环，易化条件反射的形成。
1.4 其他药物的评价
神经行为学方法除了主要用于以上药物的评价，还用于抗疲劳药物、促进睡眠药物以及镇痛药物的评价中，抗疲劳药物大多具有兴奋中枢神经系统的作用，行为学检测主要采用游泳实验、转棒实验。促进睡眠药物主要采用阈下催眠实验。镇痛药物根据作用部位不同可分为中枢镇痛药和外周镇痛药，用于评价外周药物镇痛作用的方法主要有小鼠醋酸扭体实验；评价中枢镇痛药物的方法热板法、热辐射甩尾实验以及福尔马林测痛实验，目前新的研究方法有步态行为测试，通过研究动物运动的步态及足底压力评价药物的治疗作用。
2 神经行为学在药物安全性评价的应用
2.1 在一般毒性评价中的应用
神经行为学实验可以发现一些神经毒性的相关终点，长期毒性实验中增加对特异性终点的评价，可以提高实验动物的利用率，缩短危险评价所用的时间，并获得额外的数据。如评价抗抑郁药物的长期毒性实验可增加对动物自主活性的观察指标。而在一些不确定是否有神经毒性的创新药物评价中，神经毒性筛查也可与长期毒性实验相组合，筛查的目的在于确定是否需要进行附加的更加深入的神经毒理学实验，如步态异常有助于毒性部位的确定，例如下运动神经元疾病可致跨越步态；剪形步态和僵硬步态说明上运动神经元损害；小脑功能不良可致共济失调及步态蹒跚。关于神经系统的毒性特征，犹如靶器官毒性一样，能随染毒期限的长短表现不同。神经毒性作用的意义取决于它的可逆性，一般来说，不可逆作用较可逆作用严重，神经系统的区域对生理功能影响较其他系统更为重要。
2.2 在安全性药理评价中的应用
由于毒物对神经系统的作用范围很广，一般采用功能组合实验来评价药物对神经系统的安全性。目前动物神经行为测试还没有一套标准模式的神经行为功能测试组合，只是经济合作与发展组织（OECD）在感觉、运动、认知等方面推荐了一些测试方法，综合评价被测化学物质的神经行为毒性。国家食品药品监督管理总局（CFDA）规定中枢神经系统药物安全性评价可定性和定量评价给药后动物的运动功能、行为改变、协调功能、感觉 / 运动反射和体温的变化等，以确定药物对中枢神经系统的影响。当核心组合实验及文献报道提示药物存在潜在的与人体安全性有关的不良反应时，应进行追加和 /或补充的安全药理学研究。追加的安全药理实验是除了核心组合实验外，反映受试物对中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统的深入研究。如追加的安全药理学实验对中枢神经系统的影响包括对行为、学习记忆、神经生化、视觉、听觉和 / 或电生理等指标的检测。
2.3 药物依赖性的评价
几乎所有的依赖性药物，如阿片、酒精、可卡因、苯丙胺、尼古丁等都会使滥用成瘾者戒断后出现情绪问题，包括抑郁、焦虑、缺乏等，是药物依赖患者急性或慢性戒断期常见的特征，也是引起药物依赖者对药物产生心理依赖和复吸的重要原因。药物依赖与冲动行为有着密切的联系，药物依赖能够使冲动行为发生变化；同时可以诱导动机奖赏系统及学习记忆相关脑区内神经元结构发生可塑性改变，该变化在停药后仍可长期存在。对于精神依赖性由于是机体对药物内在的感知综合体现，如动物心理满足感、欣，同时，本身冲动性不同的个体对依赖药物的易感性存在个体差异。实验评价难度较大，目前评价方法主要结合抑郁、焦虑、学习记忆等神经行为学方法进行研究，其中应用较多的是操作式行为实验方法，如奖赏实验及采用自身给药模拟人的觅药行为和药物辨别行为，因该方法需要仪器设备复杂，实验周期较长。目前广泛用于药物精神依赖的评价方法是条件位置偏爱实验，该方法经济简便。
2.4 在发育神经毒性评价中的应用
篇（2）
通过这次的《组织行为学》讲座，我了解到组织行为学是研究组织中人的行为与心理规律的一门科学，其实更是一直与人沟通与人交流的一种方式和方法。它是行为科学的一个分支，随着社会的发展，尤其是经济的发展促使了企业和组织的发展进步，组织行为学越来越受到人们的重视。“沟通，从心开始”为主题的讲座，令深深感受到组织行为学的魅力，建立有效沟通，完善工作方法。
通过课程，使我更加客观的看待每个人自身的优点和缺点，然而不是所有的人在任何时候都会扬长避短、知己克己、取长补短，在生活、工作中，我们有可能不了解自己，不了解他人，不了解某个场合的某种情况，所以会有生活、工作中的种种不顺心或者不愉快，小矛盾、大干戈油然而生。而事后，我们静下来的时候也许还会抱怨，也许会反思，自己的不对或他人的不是。这其中就涉及到组织行为学中许多观点。在现实的工作群体中，我们首先要进行反思自身问题，善待他人，他人也会善待自己。我们每个个体是相互交融在一起的，无论是家庭的一员还是作为团队的一员，我们要处理好团体与个体关系，切同存异，实现共同进步。
人是理性动物，也更是感情动物。很多时候人做事情都是会被感情所左右的，要想通过沟通达成意见的一致就要学会倾听别人的想法，也要站在别人的立场上去思考问题。心存他人，尊重他人，这样才可以得到他人的尊重和认可。当做一件事情或完成一个任务，各部门或各人之间有分歧的时候，需要去积极沟通和化解分歧，但是沟通并不等于只去表达你自己的认知和看法，以得到别人的赞同，而是要用一种尊重的态度去聆听各部门或每个人的观点，然后结合自己的想法找出分歧之处，，用最好的方式去向对方表达你的观点和看法，最后征求对方的意见已达到最后的一致。
最后要感谢王延骏和李可永等教授和老师辛苦授课和讲解，也衷心的感谢新疆农业大学精心为我们组织了一次“沟通，从现在开始”的为主题的讲座，让我们更深入了解了组织行为学的魅力和精髓所在。
篇（3）
中图分类号：TS262.5 文献标识码：A 文章编号：1674－0432(2011)－05－0085－1
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物普通昆明种小鼠，雌雄各半，20+2g，标准环境喂养(北京大学医学部动物实验中心提供)。
1.1.2实验试剂乙醇(北京化工厂，分析纯)；异戊醇(天津津科精细化工研究所，分析纯)；异丁醇(东京化工株式会社，分析醇)；正丙醇、正丁醇(德国FLUKA公司，分析纯)；甲酸、乙酯、乙酸乙酯、已酸乙酯、乙酸异戊酯、乙酸异丁酯
1.1.3实验仪器滚筒运动测试仪(RB－200B型)；1 ml针筒注射器(国营常州注射器厂)
1.2方法
1.2.1灌胃高级醇、酯类配比高级醇成分配比：异戊醇50％，异丁醇30％，正丙醇15％，正丁醇5％。酯类成分配比：甲酸乙酯25％，乙酸乙酯50％，已酸乙酯5％，乙酸异戊酯10％7,酸异丁酯10％。
1.2.2滚筒实验昆明小白鼠，20±2g，雌雄各半，随机分为对照组，3个灌胃酯溶液组和3个灌胃高级醇溶液组，剂量分别为0.5ml／20g，1.0ml／20g，2.0ml／20g。每组15只，通电后，小鼠在滚筒中滚动，记录10分钟内掉筒及爬筒次数。
1.2.3统计学分析结果用iS表示，并采用excell进行统计分析。
2 结果与讨论
2.1酯类对小鼠行为学的影响
啤酒在发酵过程会产生大量酯类并在贮存过程酯类会有所增加。表1可以看出，每组剂量下，小鼠的掉筒次数会随着酯类浓度的增加而增加，但经统计学分析，不同含量酯类物质在不同给药剂量下对小鼠掉筒次数影响并不显著，说明酯类对小鼠行为有一定的兴奋作用，但这种刺激作用不强烈。
2.2高级醇对小鼠行为学的影响
经实验表明对小鼠进行高级醇灌胃后有头晕感，当高级醇含量超过100ppm，这种影响非常显著。由表2分析，正常小鼠灌胃空白2ml后，意识清醒。在5分钟内，平均掉筒次数1.73±0.75，
掉筒后在电击作用下重新爬上滚筒。灌胃高级醇30ppm，随剂量增加掉筒次数增加不明显。
灌胃高级醇70ppm，1ml，掉筒显著(P
篇（4）
中图分类号：G804．7 文献标识码：A 文章编号：1007―3612(2(107)01―0038－03
投稿日期：2005－03－08
基金项目：本研究获得华东师范大学2004年优秀博士生培养基金、河北省科学技术研究与发展计划项目(编号：042461600D)和河北师范大学青年基金(编号：L2004Q17)资助。
作者简介：崔冬雪(1974－)，女，博士，副教授，研究方向体育锻炼与身心健康。
抑郁症的发病率随着人们生活水平的提高、工作生活压力的增加呈逐年上升趋势。专家预测2020年抑郁症将成为人类的第二杀手。抑郁症给患者及其家人带来了极大的痛苦。对于抑郁症的治疗，也花费了大量的财力、物力、人力。因而，预防抑郁症的发生也就显得尤为重要。锻炼心理学的研究成果表明，运动锻炼具有改善消除人们的不良情绪的作用，提示对于抑郁症的发病有一定的预防作用。基于此，以动物为研究对象，探讨游泳锻炼对处在慢性应激期间动物行为学指标和肾上腺、海马组织以及血浆皮质酮水平的影响，阐释锻炼预防抑郁症的部分机制。
1 材料与方法
1．1实验动物及分组健康雄性SD大鼠，体重130～150 g，上海医科大学实验动物中心提供，实验动物机构许可证号：SCXK(沪)2003－0002。在自由饮食、光，暗周期为12 h／12 h(光照时间06：00―18：00)、背景噪音为40±10 dB、温度为21±3℃、湿度为60％－70％的条件下饲养。
所有动物适应饲养1周，期间进行蔗糖溶液消耗训练，1周后测定动物体重、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量及OPEN－FIELD TEST行为学得分，选择各指标相近的动物60只，随机分为对照组(C)、运动组(E)、模型组(M)、运动应激组(ES)和运动应激运动组(ESE)，12只／组。其中E组在实验途中丢失1只，59只动物数据进入最后结果分析。
1．2实验设计实验共进行14周。C组、M组：第1周－第10周正常饲养，6只／笼。E组、ES组、ESE组：第1周，前3d游泳10 min／d，后3 d游泳20 min／d；第2周，前3 d游泳30 min／d，后3 d游泳40min／d；第3周，前3 d游泳50min／d，后3天游泳60min／d；第4―10周，6 d，周、60 min／天的游泳锻炼。第11周一第14周：C组正常饲养，6只／笼；E组6 d，周、60 min／d的游泳锻炼。M组、ES组、ESE组接受包括电击足底(电压40 v，每次10 S，间隔50 S，刺激1次，共30次)、冰水游泳(4℃，5min)、热应激(45％，5 min)、夹尾(止血钳，距尾根1 cm，1 min)、禁水、禁食、昼夜颠倒、明暗交替(1 h照明，l h黑暗，进行12h)、拥挤等刺激组成的慢性中等不可预知应激刺激，1只／笼；期间ES组停止锻炼、ESE组继续锻炼，所有应激动物均独自接受应激刺激。
1．3动物行为学指标测试Open―Field TeSt行为测试：将动物置入80 cm×80 cm×40 cm周壁、箱底为黑色、底面积由25块相等的16 cm×16 cm正方形组成，以白线划分的行为箱正中央格后开始测定，每次测定3 min，以穿越底面积块数为水平活动得分，直立次数为垂直活动得分。每只动物只进行一次行为测定，测定完毕，粪便清理干净后，进行下一只测定。测试过程采用摄像机记录，全部拍摄完毕后，进行录像回放，记录动物活动得分。记录动物活动得分采用单盲法。
1％蔗糖溶液消耗量：测定前禁水、禁食24h，每周四晚18：00－19：00测定动物1h饮用1％蔗糖溶液的量。测定前、后水瓶的重量差为动物1h饮用1％蔗糖溶液的量。1％蔗糖溶液消耗量以1h摄入1％蔗糖溶液的量(mg)，动物体重(g)进行评定。
食物消耗量：每周六晨6：00给动物鼠笼食槽中放入50g动物饲料，同时将群养的动物分笼，1只／笼。次晨6：00称量剩余饲料，计算出每只动物24 h的食物消耗量，食物消耗量以24 h的摄入食物量(mg)，动物体重(g)来评定。
1．4组织样品制备及荧光分光光度法测定皮质酮 海马和肾上腺组织样品制备：大鼠断头处死后，迅速剥取全脑，脑组织用冰生理盐水冲洗，去除脑膜，在冰皿中分离海马(根据大鼠脑立体定位图谱进行定位)，用滤纸吸干水分并称重，低温保存、待测。剖腹取出大鼠的肾上腺组织，用生理盐水将组织中的血液冲洗干净，用滤纸将组织中的水分吸掉，剔除周围的脂肪组织称重，并记录，低温保存、待测。
血浆样品制备：大鼠断头取血，将血液装入加有20 uL／mL全血的0．3M EDTA・2Na溶液抗凝剂的采血管中，轻缓混匀迅速低温离心(4℃；／4000rp，离心20 min)，取血浆低温保存，待测。
皮质酮标准品购自Sigma公司，其它试剂均为国产分析纯。将制备好的样品按照参考文献的方法进行处理后，在日本日立F－4500荧光光度计测定样品中皮质酮的荧光强度，通过制作标准曲线计算组织中皮质酮的含量。
1．5数据处理所有数据均以平均数±标准差表示，采用SPSS10．0 for windowS数据处理软件进行分析。数据进行ANO-VA方差分析和T检验处理，以P＜0．05为相差显著。
2 结果
2．1实验不同阶段动物行为学指标测定结果
2．1．1 第10周各组动物行为学指标测定结果实验的前10周动物可以根据有无游泳锻炼分为两组，即运动组和非运动组，探讨游泳锻炼对动物行为学指标的影响。T检验表明，动物的食物消耗量和10周的体重增长量在显著性差异(P＜
0．05)，其他指标间均无差异(P＞0．05)。
2．1．2实验结束后各组动物生理、行为指标测定结果实验后4周，慢性中等不可预知应激刺激与游泳锻炼共同作用导致各组动物行为学指标的变化。动物体重增长量为后4周动物体重的增长量，其他指标均为结束时测定的结果。方差分析显示：M组动物体重增长量、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量和Open―Field行为指标显著低于C组和E组(P＜0．01，P＜0．05)。ES组和ESE组的动物体重增长量、食物消耗量、1％蔗糖溶液消耗量显著高于M组(P＜0．01，P＜0．05)，Open―Field行为指标部分低于M组(P＜0．01，P＜0．05)。
2．2皮质酮测定结果方差分析显示，血浆、肾上腺和海马组织中皮质酮的含量M组显著高于c组和E组(P＜0．01)；E组显著低于C组(P＜0．01)。ES组和ESE组在游泳锻炼和慢性应激刺激双重影响下，皮质酮在动物体内发生了变化。血浆皮质酮含量分析显示：ESE组显著低于M组和ES组(P＜0．01)；ES组动物显著高于E组(P＜0．01)。肾上腺组织皮质酮含量分析显示：ES组和ESE组显著低于M组(P＜0．01，P＜0．05)；ES组显著高于E组和KSE组(P＜0．01)。海马组织皮质酮含量分析显示：ES组与ESE组显著低于M组高于E组(P＜0．01，P＜0．05)。
3 讨论
3．1慢性应激抑郁模型的讨论 到目前为止，已有20多种公认的方法可作为抑郁症研究的动物模型，他们可以分为应激模型、孤养模型、药理学模型、嗅结节切除模型等。从人类抑郁症发病的实际情况来看，应激性生活事件是抑郁症的明显促发因素。因此，以应激模拟造成抑郁症的环境来制作抑郁动物模型，其发病机理可能与人类抑郁症更接近。本实验参照文献方法，利用长期不可预见到的中等强度应激刺激和动物孤养，造成动物抑郁状态。慢性中等不可预见性应激抑郁模型是目前应用和研究较多的抑郁症模型，其理论依据与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源导致抑郁症的发生，并加速抑郁症发展的机理更接近。此模型表现出动物情绪抑郁状态、兴趣丧失、缺乏与抑郁症状临床诊断中的精神运动改变、兴趣或的丧失有一定程度的相似性，能较为真实地模拟抑郁症病人的某些症状和病因，可用于抗抑郁药物作用机制和抑郁症的病理生理机制研究。
3．2运动量的设计讨论动物进行游泳锻炼的安排模拟了人的健身锻练，运动量由小到大逐渐增加，直到达到一个适宜范围进而巩固。大鼠游泳时间从10 win开始，每10 min递增，直到60 min，需要3周的时间过渡。每一个时间进行3次的锻炼适应，到60 min达到稳定进而保持该运动量到实验结束。与人实际锻炼的过程相吻合，遵循了运动锻炼中的渐进性原则。
3．3荧光分光光度法测定皮质酮的讨论 测定皮质酮的方法较多，目前较为常用的有荧光分光光度法、放射免疫法、酶免法等。荧光分光光度法与其他方法相比，存在一定的不足，其精度没有其它方法精确，特异性强。可能会受到其它同类物质(皮质醇)的干扰，但是其操作简便、仪器设备要求较低，费用消耗较低。另外，由于在大鼠体内应激激素以皮质酮激素为主，与皮质醇的比值为20：1，所以用荧光分光光度法测定皮质酮的含量，可以反映动物体内皮质酮的变化趋势，能够说明研究的问题，因而可以采用。
3．4实验不同阶段各组动物行为学指标测试结果分析 经过10周的游泳锻炼后，运动组与非运动组只有体重增长量和食物消耗量组间存在显著性差异，其它指标间则不存在差异。表明：游泳锻炼对于体重增长量有着良好的控制作用，可能是游泳锻炼增加了机体能量的消耗，不易造成能量的积累，致使体重增加缓慢。此作用在人类大众健身中也得以体现，并作为健身、减肥、重塑身体外形的重要手段之一。
游泳锻炼对大鼠而言是一种应激刺激，开始时可能对其本身及行为学产生一定的影响，但是随着游泳锻炼时间的延长，动物对此应激产生了脱敏，进一步适应了游泳锻炼。游泳锻炼10周后，各指标的结果也表明动物对游泳锻炼的适应。
大鼠遭受慢性应激后的行为与抑郁症病人的临床表现有相关性，如大鼠在Open―Field行为箱中活动减少反映了抑郁症病人精神运动迟滞的症状，大鼠1％蔗糖溶液摄入量的减少反映了抑郁症患者兴趣缺失，并且二者都有体重下降等。实验后4周，慢性应激介入，动物各组间发生了显著性变化。M组动物体重增长减慢，甚至出现负增长，兴趣缺失，行为活动减少，模拟了人类抑郁症的临床表现，表明模型制备成功。ES组、ESE组与M组相比在体重增长量、食物和1％蔗糖溶液消耗量方面呈显著差异。表明游泳锻炼可以拮抗部分应激所致不良影响，同时也表明游泳锻炼的功效是有一定限制的。
生物、心理、社会医学模式认为：人的心理与生理、精神与躯体、机体内外环境是一个完整的统一体，心理、社会因素与疾病的发生、发展、转归有着密切的联系，在考察人类的健康和疾病时，既要考虑生物学因素，又要重视心理社会因素的影响。抑郁症的发病不仅仅心理因素为其致病因素，同样生理因素如疾病亦是其致病因素之一。在本研究中所用应激刺激强度为中等强度，对于机体产生损伤的几率较低，其中主要为精神因素所致，因无法摆脱刺激，精神处于极度紧张状态。正如人类在社会生活中遇到的应激刺激对人类本身所产生的影响一样。
3．5各组动物肾上腺、海马组织和血浆中皮质酮含量变化分析反复的心理应激可使血液中皮质酮持续升高，引起血液中糖皮质激素积累，造成内分泌代谢过分增加。本研究结果显示，M组动物血浆、肾上腺和海马组织中皮质酮的含量均高于其他四组，可能是长时间的、不可预知的、应激刺激致使皮质酮持续升高，糖皮质激素积累，造成内分泌代谢过分增加的结果。提示M组动物对慢性应激刺激产生了不适，动物处于慢性应激状态，出现内分泌功能失衡。结合在慢性应激期间随着时间延长，动物食欲减少、体重增长缓慢、毛色枯黄、精神抑郁等行为表现，推测M组动物处于抑郁状态，支持了抑郁症患者的皮质醇含量较高的观点。
持续14周的游泳锻炼可以使动物肾上腺、海马组织和血浆中皮质酮的水平显著低于对照组，与已有研究结果一致。表明适度的锻练对皮质酮的释放有良性的调节作用，能抵抗糖皮质激素的过量分泌。ES组和ESE组动物皮质酮的含量均低于M组，可能是慢性中等应激和游泳锻炼产生了交互作用，游泳锻炼拮抗应激所致消极影响的结果。提示适宜的运动锻炼可以提高机体对抗应激的能力，这也许是游泳锻炼预防抑郁发生的一种可能机制。
皮质酮水平在海马组织中的变化有着重要的意义。研究发现，海马富含糖皮质激素受体(GR)，而且是中枢GR含量最多的脑区，由于GCs与GR过量结合会对海马产生不利影响，因此，应激和HPA轴机能亢进时，海马极易受到高水平的GCs攻击，影响其正常的生理功能，甚至使其受到损伤。大量资料表明，海马有大量神经纤维投射到下丘脑，影响下丘脑的分泌功能，并参与HPA轴的负反馈调节。同时运动锻炼降低应激刺激导致海马组织中皮质酮水平的升高，可能是运动锻炼预防抑郁症发生的途径。
4 结论
篇（5）
抑郁症是一种常见的情绪障碍性疾病，表现为一种持久的抑郁状态，以心境低落、躯体不适和睡眠障碍等为主要症状［1］。是危害全人类身心健康的常见病，其终生患病率为6.1%～9.5%［2］。据专家预测，到2020年，精神疾病在人们的疾病负担中将列首位，而抑郁症则占精神科疾病的47%［3］。抑郁症及其治疗引起内外广大学者的广泛重视。本研究旨在通过观察针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响，评定针刺抗抑郁疗效。
1 器材
1.1 药品多虑平：南京白敬宇制药厂产品，批号：20040912。
1.2 动物（200±20）g Wistar雄性大鼠，由山东大学实验动物中心提供，合格证号：鲁动质字：20040816。
1.3 器材“华佗”牌32号1.0寸针灸针，苏州医疗用品厂产品；穿梭箱：山东中医药大学中西医结合基础研究室提供，根据文献介绍制备［4］，大鼠穿梭箱有两室，每室30 cm×30 cm× 20 cm，可人为开闭，箱底为不锈钢栅条，条间距离为1 cm，两室栅条可错时通电，一室与刺激器接通时，另一室为安全室；敞箱：根据文献介绍，自行制备［5］，标准为40 cm×80 cm×80 cm，周壁、底面为黑色，底面以白线划分为面积相等的25块。
2 方法
2.1 模拟临床建立大鼠学习无助模型将大鼠放入穿梭箱，中间通道关闭，通过底部的金属栅条给予220V，0.8 mA的方波刺激，刺激15 s，间隔45 s/次，共60次，总刺激时间15 min，进行不可逃避的电休克即前休克动物（pre-shocked animals）制作［1］。
2.2 分组及给药(200±20)g Wistar雄性大鼠40只，按体重均衡随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药多虑平组、针刺组，每组10只。空白组及模型对照组分别给予凉开水1 ml/100 g，ig；多虑平对照组给予多虑平3 mg/kg，生理盐水配成30%水溶液1 ml/100g·ig ；空白对照组大鼠只放入穿梭箱内而不进行电刺激，时间相同。第2天除重复进行前一天实验并开始给药，连续给药14 d。最后一次给药后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。
2.3 针刺取穴及操作方法针刺组根据《实验针灸学》［6］大鼠穴位定位方法，选择百会、内关、神庭、三阴交穴，并参照人和动物的穴位解剖结构特点，在动物针灸穴位图谱的基础上，于大鼠前正中线上，额顶骨缝交界线前方处定位神庭穴。其他穴位仿人取穴。针刺方法: 穴位常规消毒，百会穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，进针深度约为0.2 cm。内关直刺0.3 cm，三阴交直刺0.2 cm。每穴行均匀捻转刺激30 s，留针10 min,每日治疗1次,连续14 d。最后一次治疗后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。
2.4 敞箱实验将各组大鼠依次放入自制敞箱，以动物穿越底面块数为水平运动（crossing）得分，直立次数为垂直运动（rearing）得分，记录其水平运动、垂直运动次数，每只动物测定1次，测定时间为3 min/次，记录水平运动得分和垂直运动得分情况。
2.5 条件回避实验（conditioned avoidance testing）继敞箱实验后，大鼠放入穿梭箱后适应5 s，进行铃声刺激，非条件刺激为足电休克0.8 mA，在铃声响起3 s后开始方波输出电刺激，当动物逃到安全室后停止铃声和刺激，如未能逃避时刺激达30 s时停止。1次/min，共进行30次，刺激间隔为27 s。测定回避成功次数和逃避潜伏期。 动物在铃声开始3 s内逃到安全室，记录回避成功一次，逃避潜伏期为0；刺激后才逃避的，其潜伏期记录是从刺激开始到逃避完成的时间；到最后未能逃避的，则潜伏期为30 s。
2.6 统计学处理所有实验数据用 ±s表示，计量资料采用t检验、q检验进行差异显著性检验；计数资料采用四格表的确切概率法检验。
3 结果
3.1 针刺对学习无助模型大鼠敞箱实验的影响
3.1.1 水平运动针刺组、多虑平组、空白组均优于模型组。结果见表1。
表1 对大鼠水平运动的影响（略）
为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表2。
表2 q检验结果（略）
由此可见，空白组与模型组有显著性差异，说明此造模方法成功；针刺组及多虑平组与模型组有显著性差异，其差异具有统计学意义；而前两组与空白组的差异及前两组间的差异不具有统计学意义，说明针刺与多虑平均有改善抑郁模型大鼠水平运动状态的作用，且二者作用相似。
3.1.2 垂直运动各处理因素对实验动物垂直运动的影响无显著差异。结果见表3。
表3 对大鼠垂直运动的影响（略）
为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表4。
表4 q检验结果（略）
由此可见，各处理因素对大鼠的垂直运动的影响无统计学意义。
3.2 针刺对学习无助模型大鼠条件回避实验（conditioned avoidance testing）的影响
3.2.1 回避成功空白组、多虑平对照组、针刺组大鼠，回避成功次数较多。结果见表5。
表5 回避成功次数（略）
本组数据采用q检验。结果见表6。
篇（6）
中图分类号：R743.34 文献识别号：A
出血性脑卒中是原发于脑实质内的非外伤性出血，致残及致死率高较高，该病严重危害着人类的健康。对脑出血的实验研究一直受到广泛重视，脑出血造模的稳定性、同患者发病表现的接近性直接关系到实验研究的科学性和实用性。本实验研究通过鼠尾动脉血分次回注自体大鼠脑组织内，建立脑出血的大树模型。
1资料与方法
1.1实验仪器 脑立体定向仪 （日本）；100 μL微量注射器，涡轮牙钻机；手术相关器械
1.2一般资料 近交成年雌性SD大鼠90只，体重（300±20）g。由河北医科大学实验动物中心提供，标准普通饲料喂养和自由饮水，昼夜自然节律，饲养环境为河北大学医学部动物实验中心多层层流架。
1.3方法 大鼠脑出血模型的制备：应用10%水合氯醛对大鼠腹腔注射量为300 mg/Kg进行麻醉，头部备皮并应用碘伏常规消毒后，俯卧位固定于定向仪上，前囟抬高1 mm，取长度约为2 cm正中纵形切口，小型扩皮器牵开切口，取前囟点中线右侧旁开3.0 mm，沿矢状面向后1.5 mm，牙钻钻透颅骨，深及骨膜。在消毒后在鼠尾腹侧正中做一纵行切口，抽取尾动脉不加抗凝剂的动脉血液约60～70 μL。将针头垂直于颅骨骨孔的方向，进针约6 mm，缓慢注入50 μL自体动脉血液，注血时间以两分钟为宜，为防止鼠血反流，将针留置10 min。缓慢退针，骨蜡封闭颅骨骨孔，缝合手术创口。
1.4行为学的分级评估 参照Longa 五级评分法[1]，对大鼠进行神经功能缺损评分：0级：无体征，记0分；Ⅰ级：动物不能完全伸直其前肢，记1分；Ⅱ级：动物一侧肢体瘫痪，有追尾现象，记2分；Ⅲ级：动物不能站立/ 打滚，记3分；Ⅳ级：无自发性活动，有意识障碍，记4分。
2结果
大鼠实验脑出血造成后，进行行为学评分，每只大鼠均采用Longa方法，反应其行为学变化。根据对实验动物的观察，在大鼠大脑注射自体鼠尾动脉血液后，动物迅速出现行为和神经功能异常，大鼠反应迟钝、皮毛无光泽、精神萎缩、进食下降，对侧肢体出现瘫痪，行走追尾，严重者动物不能站立/打滚，个别大鼠呈现意识障碍，昏迷等表现，其功能异常程度与出血的严重程度相关。脑组织标本可见明显的血肿占位，结合对大鼠造模3 d后进行行为学评分，评分2～3分得提示模型建立成功。评分1分的4只，2分的34只，3分46只，4分的6只。造模成功80只，成功率88.9%。
3讨论
脑出血动物模型的制备成为了研究脑血管病不可或缺的基础，而好动物脑出血模型是接近于人类脑出血的血肿、水肿、缺血缺氧等病生理变化，符合疾病的发展规律的，并且动物模型具有较好的稳定性、可重复性。
动物模型的应用，使脑出血过程的神经生物学基础研究得到较大进展。在过去几十年里有很多方法造脑出血的动物模型，用于模仿脑出血的发病机制，其原理各不相同，效果也不尽相同，模型的选择至关重要。常用的方法有以下几种：①胶原酶诱导脑出血模型，应用胶原酶向脑组织中注入，胶原酶刺激破坏脑内组织，破坏血管而渗血形成血肿[1]。②微球囊充胀脑出血模型，在大鼠大脑尾状核包埋微小气囊，充盈气囊造模，产生占位效应脑部伤害一致，可重复性好，但同颅内血肿产生的其他病生理改变不同。③自发性脑出血模型，用遗传方式筛选出自发性高血压大鼠，待出现高血压严重并发症脑出血后提示造模成功，本模型能够较准确的模拟高血压脑出血等病理生理变化，存在的问题是获得脑出血模型的时间不能把握，出血部位及大小各异，各模型间对比性差；④凝固自体动脉血注入脑出血模型，抽取大鼠股动脉血，静置5 min待动脉血凝固后后脑内注射。此方式可控制鲜血沿针道返流问题，但同时存在血液凝固后血肿在脑内塑形困难[2]。⑤应用立体定位技术取自体血注血脑出血模型，即本研究采用造模方法，新抽取鲜鼠尾动脉血，应用立体定位仪固定微量注射器，精确定位于尾状核，穿刺并脑内注血，注血量50 μL血相当与人35 mL的血肿，应用非肝素化自体动脉血，更接近接近人类自发性出血性卒中，适合研究脑出血病理生理特点，能够观察各种因子在血液凝固过程中对脑血流及脑组织细胞代谢的影响，本研究取SD大鼠脑内最大的核团--尾状核，是高血压脑出血最好发部位，对脑出血的研究提供可靠的依据[3]。
根据对实验动物的观察，其功能异常程度与病变严重程度一致。脑组织标本在尾状核部位可见明显的血肿形成，提示模型建立成功，本组大鼠造模成功率88.9%，本造模方式是能够较好的模拟脑出血的病理生理的改变，应用此方法保证了在对脑出血的研究过程中确保实验数据的真实性和可靠性。
参考文献：
篇（7）
目的对比研究改工艺后消栓通络片与市售消栓通络片对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用差异。方法采用颈内动脉插入尼龙线栓的方法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型。观察给药后各组大鼠行为学评分、测定脑梗死面积及血清超氧化物歧化酶（SOD）、NFκB、caspase3含量的差异。结果改工艺后的消栓通络片高、中剂量组均能有效缓解4h，24h时MCAO引起的行为学病变，降低行为学评分；高、中、低剂量组均能升高MCAO引起的SOD降低；高、低剂量组能明显降低MCAO引起的血清NFκB的升高；中、低剂量组对MCAO引起的Caspase3的显著升高有一定抑制作用。与市售消栓通络片比较，改工艺消栓通络片从大鼠行为学评分的降低，血清SOD活性的增加，血清Caspase3、NFκB的表达效果均有优于市售消栓通络片的趋势。结论改工艺消栓通络片各剂量组对脑缺血进展期大鼠均有一定的恢复作用，其药效略优于市售消栓通络片。
关键词：
中药工艺改进；黄芪；三七；槐花；丹参；缺氧缺血，脑；大鼠
消栓通络片是治疗中风恢复期的有效验方，有活血化瘀，温经通络的作用。临床常用于脑血栓引起的半身不遂，肢体麻木的治疗。我们对该方的传统制剂工艺进行了改进，将黄芪、三七、槐花、丹参四味药材由原工艺的水提改为60％醇提。制剂改进后规格由原来的1．8g生药／片可增加为2．5g生药／片，服药量将明显减少，增加病患用药依从性。本实验采用MCAO法制作大鼠脑缺血再灌注模型对比观察改工艺后消栓通络片与市售消栓通络片对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用差异及其作用机制。
1实验材料
1．1药物与试剂
1．1．1供试品
改工艺消栓通络片浸膏粉由康缘现代中药研究院提供，规格：12．27g生药／g提取物，批号130926。供试品制备方法：将川芎、桂枝、木香、山楂、泽泻、郁金六味药材水煎，合并煎液，滤过、浓缩，加乙醇调至70％，静置，取上清液浓缩、干燥。黄芪、三七、槐花、丹参四味药材60％醇提，合并醇提液，滤过。大孔树脂纯化，浓缩，干燥。将两次所得干浸膏粉碎，加入适量辅料，混匀，加入冰片，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，包衣，制成2．5g生药／片的药物。
1．1．2对照药
依达拉奉注射液：20mL：30g，2支装，吉林省辉南长龙生化药业股份有限公司，批号2013051002；消栓通络片（市售）：1．8g生药／片，某公司，批号：130301。
1．1．3试剂
水合氯醛，批号：20130426；羧甲基纤维素钠，批号：20120330；磷酸氢二钠，批号：20131125，均为国药集团化学试剂有限公司试剂。氯化钠，南京化学试剂有限公司，核因子κB放免药盒，批号：20140401；活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3放免试剂盒，批号：20140410；超氧化物歧化酶检测试剂盒，批号：20140101，均为北京华英生物技术研究所试剂。
1．2主要仪器
电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；CENTRFUGE5840型冷冻离心机，Eppendorf；DKS26恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；DHG9076A电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。
1．3实验动物
SD大鼠，雄性，体重280～330g，SPF（无特定病原体）级，上海西普尔－必凯实验动物有限公司，许可证号码：SCXK（沪）2013－0016。
2实验方法
2．1动物分组
取体重280～330g的雄性大鼠，随机分为7组。分组如下：假手术组（等容积5‰CMC－Na）、模型组（等容积5‰CMC－Na）、阳性药依达拉奉组（1．13mg•kg－1大鼠）、市售消栓通络片组（2．7g生药•kg－1大鼠）、消栓通络片高剂量组（0．44g提取物•kg－1大鼠）、消栓通络片中剂量组（0．22g提取物•kg－1大鼠）、消栓通络片低剂量组（0．11g提取物•kg－1大鼠）阳性药腹腔注射给药，1．13mg•kg－1大鼠，其它各给药组大鼠于术前0．5h灌胃给药1次，10mL•kg－1大鼠。1次／d，连续3日，假手术组、模型组给予等容积5‰CMC－Na溶液。
2．2造模方法
采用颈内动脉线栓法复制左侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。参照文献方法加以改进［1］，分离出颈总动脉，继续向下分离并结扎颈外动脉，分离出颈内动脉，在ECA距ICA2mm处剪一小口，将一尼龙栓子插入ECA并进入CCA，轻扎备线，防止出血。剪断ECA，松开ICA的动脉夹，牵引ECA，使其进入ICA，继续向下推进直至尼龙线插入深度约为18mm停止。此时松开CCA动脉夹，扎紧备线，外留1cm长线头，缝合皮肤，回笼饲养。于缺血2h后再灌注，再灌注时轻拉尼龙线，使尼龙线拔出ICA，进入ECA残端，血流再通，修剪尼龙线栓尾部，回笼自然喂养。
2．3评价指标
2．3．1对大鼠神经行为学的影响［1］见表1。
2．3．2对缺血梗死面积的影响
［2］TTC染色：大鼠于造模后72h取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，置－20℃冰箱冰冻20min，沿冠状面切成5片，每片约2mm，置5mL含有1％TTC的磷酸缓冲溶液中避光温孵10min染色，4～5min翻动一次。经染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，而梗死组织呈白色。用图象测量软件Imagepro－Plus分析脑片面积，分别计算出5个脑片共10个面的总面积和梗死区域的面积，求出梗死区面积占总面积的百分比，即梗死率。
2．3．3对血清超氧化物歧化酶（SOD）
NFκB、caspase3含量的影响造模后72h，于最后一次给药后0．5h，麻醉大鼠，劲总动脉插管取血，3000r•min－1离心10min，分离血清，用生化法检测血清SOD活性，用放免法检测血清NFκB、caspase3含量。
2．4统计学方法
应用SPSS13．0数理统计软件进行相关数据统计分析，实验的计量数据资料采用x±s表示，各组间的比较采用t检验。当P＜0．05时，差异有统计学意义。
3实验结果
3．1消栓通络片与市售消栓通络片对缺血性脑损伤模型大鼠行为学评分及梗塞率的影响
脑缺血后4h，各给药组行为学评分均有降低，与模型组相比，依达拉奉组、消栓通络片高、中剂量组行为学评分均下降（P＜0．01）。其余各组差异无统计学意义（P＞0．05）。24h，市售消栓通络组和消栓通络片高中剂量组大鼠行为学评分下降明显，与模型组相比差异有统计学意义（P＜0．05），其余各给药组分值也有下降，但与模型组相比差异无统计学意义（P＞0．05）。造模后72h，大鼠脑梗死明显（P＜0．01），除改工艺低剂量组，其余各给药组大鼠脑梗塞率均有下降，依达拉奉组下降明显，与模型组相比差异有显著性（P＜0．01）。结果见表2。
3．2消栓通络片与市售消栓通络片对血清超氧化物歧化酶SOD、NFκB、caspase－3含量的影响
造模后72h，大鼠血清NFκB的含量较假手术组增高（P＜0．05），给予消栓通络片高、低剂量后，能明显降低大鼠血清NFκB含量（P＜0．05），其余各组血清NFκB含量与模型组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。大鼠血清caspase3含量较假手术组增高（P＜0．05），给予消栓通络片中、高剂量后，能明显降低大鼠血清caspase3含量（P＜0．01），其余各组血清caspase3含量与模型组比较差异有统计学意义（P＞0．05）。各组大鼠血清SOD含量在给予市售消栓通络片和消栓通络片各剂量组后与模型组比较均有明显上升（P＞0．01）。结果见表3。
4讨论
消栓通络片由川芎、丹参、黄芪、泽泻、三七、槐花、桂枝、郁金、木香、冰片、山楂十一味中药组成，君药川芎、丹参、郁金中含有水溶性酚酸类化合物［3～4］，其中原儿茶醛和咖啡酸具有广泛的抑菌、抗病毒、扩张心脑血管、抗血小板凝集作用，原儿茶醛等有强烈的清除氧自由基作用。还含有人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1、黄芪甲苷、丹参酮等。脂溶性成分芦丁［5］属于黄酮类化合物，有明显的扩张冠脉的作用，还有抗炎、抗菌、抗病毒等作用，可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症等。该方传统制剂工艺中黄芪、三七、槐花、丹参四味药材为水提，我们将水提工艺改为用60％醇提。制剂改进后每片含药量明显增加，服药量明显减少，增加病患用药依从性：
我们根据文献的方法加以改进，采用MCAO的方法复制中动脉阻塞的脑缺血模型，观察改工艺后消栓通络片与市售消栓通络片对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用差异及其作用机制。造模后72h，我们观察到大鼠脑梗塞率达到20．64％±4．5％，且手术大鼠出现了明显的神经行为学障碍，和文献报道相符［6～7］，说明模型复制成功。给予依达拉奉后，在急性期4h，很好缓解MCAO引起的行为学病变，降低行为学评分。给予消栓通络片与市售消栓通络片后发现，市售消栓通络片能很好缓解急性期24h时MCAO引起的行为学病变，降低行为学评分。消栓通络片高、中剂量组能有效缓解4h、24h时MCAO引起的行为学病变，降低行为学评分。
Caspase家族在缺血性脑损伤中发挥重要作用，其中Caspase－3是Caspase级联反应中下游最关键的凋亡蛋白酶，在各种因素启动的凋亡程序中起最后的枢纽作用。消栓通络片高、中剂量组能明显降低MCAO引起的血清Caspase－3的升高，缓解脑缺血进展期细胞凋亡的持续发生，从而达到脑保护的作用［8～10］。NFκB是细胞内最重要的活性蛋白转录调节因子，它调控大量基因的转录，包括细胞因子、生长因子、趋化因子、黏附因子、凋亡调控因子、炎症通路蛋白、细胞应激蛋白等。大量炎性蛋白质的表达对细胞损伤和修复过程至关重要［11－14］。消栓通络片中、低剂量组对MCAO引起的NFκB的明显升高有一定抑制作用，从而缓解MCAO后的炎症反应及细胞凋亡的持续发展，达到脑保护作用。
超氧化物歧化酶（简称SOD）是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶［2，15］，它能降低氧化应激对脑组织产生的损伤。造模后72h，在给予改工艺消栓通络片后SOD均有明显上升，提示改工艺消栓通络片各剂量组均有良好的抑制脑缺血后氧化应激的作用。
以上结果提示，改工艺后消栓通络片各剂量组对脑缺血恢复期大鼠均有一定的缓解作用。改工艺消栓通络片高剂量组在4h，减轻行为学评分的作用有优于市售消栓通络片的趋势，消栓通络片高剂量组对MCAO后大鼠血清Caspase3、NFκB的表达均有一定的抑制作用，效果有优于市售消栓通络片的趋势。其保护作用的发挥可能依赖于对炎症及神经细胞凋亡的双重抑制作用。依达拉奉对MCAO后72h大鼠脑梗塞率有明显的减小，说明其有较好抗脑缺血作用，而对72h时大鼠血清SOD活性、Caspase3、NFκB的表达无明显影响，推测其在72h时，对血清这三个因子影响较小，此时间点依达拉奉并不主要通过影响这三个因子的表达发挥抗脑缺血的作用。
参考文献：
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篇（8）
【关键词】 抑郁症 定志小丸 雌二醇 神经干细胞 皮质醇 大鼠
Abstract：Objective To study the anti-depression mechanism of Dingzhixiaowan concerning on histology of hippocampal formation. Methods 40 female rats were pided into control， depression model group (model group)， distilled water group (DW group) and Dingzhixiaowan group (Chinese herb group). Behavior points were measured by open field method. Serum concentrations of cortisol and estradiol (E2) were checked with ELISA. HE staining and electron microscopy were applied to observe the histology of neurons in hippocampal formation. Immunohistochemistry method was employed to detect Nestin expression. Results Compared with the control， behavior points， serum E2 level and Nestin expression decreased obviously and serum cortisol level increased markedly， CA3 neurons were seriously damaged in model and DW groups. While behavior points， serum E2 level did not change， Nestin expression increased obviously and serum cortisol level decreased markedly， CA3 neurons were basically normal in Chinese herb groups. Conclusion Dingzhixiaowan can protect hippocampal formation， which might be one of the anti-depression mechnisms.
Key words：depression；Dingzhixiaowan；estradiol；neural stem cell；cortisol；rat
目前认为，慢性应激刺激造成的海马结构损伤是抑郁症发病的主要原因。对海马结构来说，糖皮质激素是损伤激素，雌激素为保护激素，而女性的雌激素水平变化较大，其保护作用时常减弱，这可能是女性抑郁症发病率较高的原因。本研究以此为出发点，研究定志小丸的抗抑郁机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
成年Wistar雌性大鼠(230±20)g，辽宁中医药大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK(辽)2004-0018。适应性饲养1周后，选择体重和行为学得分相近的40只大鼠，随机分为对照组、模型组、蒸馏水组(DW组)和定志小丸组(中药组)，每组10只。对照组每笼5只饲养，其余3组每笼1只饲养。
1.2 抑郁症模型的建立
除对照组外，其余3组动物均接受慢性应激刺激，复制慢性不可预见性应激模型。其方法是：在21 d内施加电击足底(36 V交流电，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、摇晃(1 min)、夹尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每种刺激3～4次。
1.3 给药
对照组不给药；模型组只施加灌胃动作；DW组灌服1 mL蒸馏水；中药组灌服定志小丸。定志小丸为人参、茯苓、远志、石菖蒲的标准提取物(购于安徽宣城百草生物有限公司，提纯比例为5∶1)，剂量分别是10、10、6、6 g，溶于适量水中，加热后浓缩为1 kg/L。按成人用量折算成灌胃剂量[1 mL/100(g? d)]，于刺激前1 h灌服。
1.4 大鼠行为学检测
采用Open field法检测，以3 min内大鼠水平穿越方格数作为水平活动得分，以前肢抬起次数为垂直活动得分。检测过程中保证时间、光照、温度及环境噪音的一致性。检测由3人同时完成，1人负责计时，1人负责观察大鼠的水平活动，1人负责计数垂直活动。正式检测前，3人首先熟悉检测标准，并进行多次训练，尽量减少人为误差。
1.5 血清皮质醇和雌二醇检测
在第22天，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4 mL/100 g)麻醉后，腹主动脉取血，离心后取血清，冻存备用。于总医院内分泌实验室采用ELISA方法检测血清皮质醇和雌二醇(E2)含量。
1.6 海马组织学观察
将取血后的大鼠用150 mL生理盐水经主动脉快速冲洗，取一侧海马行常规HE染色，另一侧于扫描电镜下观察形态学变化。
1.7 齿状回神经干细胞(NSC)增殖检测
采用Nestin免疫组化方法，取经生理盐水快速冲洗后的海马，4%多聚甲醛固定4～6 h，30%蔗糖溶液沉底。冰冻连续切片，片厚25 μm，隔4片取1片。将切片置含新鲜0.5% H2O2的纯甲醇中30 min；0.1% Triton溶液中30 min；正常山羊血清60 min；兔抗鼠Nestin一抗(1∶2000，Sigma)，25 ℃孵育1 h，4 ℃过夜；生物素化山羊抗兔IgG(博士德二抗试剂盒)，室温下60 min；SABC复合物，室温60 min；DAB显色(博士德)。染色对照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步骤同上。利用BI-2000医学图像分析系统，计数阳性细胞数。
1.8 统计学方法
实验数据以x±s表示，采用SPSS11.5进行统计处理。
2 结果
2.1 各组大鼠海马CA3区神经元的形态学变化
光镜下可见，对照组CA3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完整，边缘清晰，死亡细胞较少；模型组和DW组可见细胞层次减少、紊乱、中断，大量细胞坏死；中药组神经元形态与对照组基本接近。电镜下可见，对照组细胞器丰富，轮廓清晰，细胞核呈圆形，核膜清晰光滑完整，核染色质分布均匀；模型组和DW组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规则，且核膜增厚，核周电子密度降低；中药组与对照组基本相同。
2.2 各组大鼠齿状回Nestin表达
镜下可见Nestin免疫阳性反应产物呈棕黄色，环形分布于核膜周围。对照组镜下可见较多的棕黄色反应物，边缘相对清晰，细胞大小相近；模型组和DW组棕黄色反应物较少，边缘不清，细胞大小不一致；中药组镜下可见大量棕黄色反应物，边缘清晰，细胞大小一致。各组Nestin阳性细胞数见表1。表1 各组大鼠Nestin阳性细胞数(略)注：与对照组比较，*P
2.3 各组大鼠行为学得分
(见表2)表2 各组大鼠的行为学得分(略)注：与本组第0天比较，P
2.4 各组大鼠血清皮质醇和雌二醇含量
(见表3)表3 各组大鼠血清皮质醇和雌二醇含量变化(略)
3 讨论
海马结构具有调节内脏功能、情绪和行为的多种作用，主要由海马和齿状回组成。齿状回存在NSC，能够增殖、迁移至海马CA3区，分化形成新的神经细胞。因为抑制齿状回NSC增殖后，许多抗抑郁药物会失效，所以，海马CA3与齿状回的关系在抑郁症发病中的作用逐渐受到重视。抑郁症的发病机制目前认为是慢性应激刺激引起肾上腺皮质过度分泌糖皮质激素，继而损伤海马神经元。本实验也观察到同样现象。由于高水平的糖皮质激素还能抑制齿状回NSC增殖，从而降低了海马结构的自我修复能力[1]，继而导致海马结构出现不可逆损伤。因此，抑郁症的根治应围绕保护海马成熟神经元和齿状回NSC两方面进行。
篇（9）
抽动—秽语综合征(tourette syndrome，ts)，又称多发性抽动症，是一种儿童期发病的慢性神经精神障碍性疾病。wWW.133229.cOM临床表现主要为突然、快速、反复、非节律性、不自主和刻板的运动性抽动和发声性抽动，还可能伴有各种行为紊乱、强迫观念与行为、认知障碍等，可不同程度地干扰和损害儿童的认知功能，影响社会适应能力。本病病因尚未明确，具有明显的遗传倾向，多见于4～12岁的儿童，患病率约为005%～3%，近年来发病呈明显上升趋势，男孩多于女孩[1]。广东省中医院儿科在临床实践中运用自拟方益智宁神口服液治疗该病，取得了较好的疗效[2]。本实验应用亚氨基二丙腈腹腔注射建立抽动—秽语综合征模型大鼠，观察该药对模型大鼠行为学和神经生物学的影响，现报道如下。
1材料与方法
11实验动物spf级sd大鼠60只，28～30d龄，体质量(250±10)g，雌雄各半。由广东省医学实验动物中心提供(许可证号:粤监证字2008d006，批号：0037766)。
12实验药品亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile，idpn)购自alfa aesar公司(批号：c7323a)，中药益智宁神口服液(由广东省中医院提供，批号：080201)，对照药物为氟哌啶醇(上海信谊九福药业有限公司，批号：08031121)。
13仪器及试剂lc26a 型高效液相色谱仪、spd26av 荧光检测器、c2r4a 数据处理机均为日本岛津公司产品，脱水机、包埋机、切片机和生物显微镜等设备为德国leica公司产品，微量组织匀浆器为millipore公司产品，zh蓝星c/s型脑立体定位仪，高氯酸、乙二胺四乙酸二钠(edtana2)均为分析纯，甲醇为色谱纯，对照品由中国药品生物制品所提供。
14模型复制参考wakata[3]的方法，将亚氨基二丙腈溶解于生理盐水，稀释成浓度100mg/ml，给药途径为腹腔注射，剂量为150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。
15分组及给药选用sd大鼠随机分为4组：空白组和模型组各10只，中药组和西药组各20只，每组均雌雄各半。治疗组在造模后第2天开始给药，中药组按20kg的儿童每天口服20ml益智宁神口服液的比例计算，每只大鼠灌胃约2ml/d;西药组按20kg的儿童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例计算，每只大鼠灌胃约015mg/d，连续14d。
16大鼠行为观察[4]采用观察评分，每次至少观察1h，主要诱发症状为运动行为和刻板运动。(1)运动行为评分：0分：安静或正常活动;1分：能过度兴奋;2分：探究行为增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板运动(或定型运动)评分：0分：无刻板运动;1分：旋转行为;2分：头和颈部的上下运动过多;3分：头、颈部的上下运动过多加旋转行为;4分：头向侧摆合并头和颈部的上下运动过多。
17神经递质水平检测[5]第14天将所有实验大鼠迅速断头处死，借助脑立体定位仪，取右脑海马组织及边缘系统(包括纹状体、隔核、层壳核、基底节、齿状回)，精确称质量，置入1ml处理液(含01mol/l高氯酸和05g/ledtana2)中，微量组织匀浆器冰溶下匀浆，4℃冰冻离心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色谱法测定多巴胺(da)和去甲肾上腺素(ne)浓度。测样时，室温下解冻，进样20μl，以峰面积外标法定量。
18统计学方法采用spss130和sas913版本进行统计学处理和分析，各组神经递质水平检测数据分别进行方差齐性和正态分布检验，方差不齐采用秩和检验，检验水平α=005。
2结果
21各组行为学观察和评分各组治疗前后运动行为和刻板运动积分见表1。模型组行为学评分与空白组比较，差异有显著性意义(p<001)，表明造模是成功的。
治疗14d后，中、西药组运动行为积分和刻板运动积分降低，与模型组比较差异有显著性意义(p<005或p<001)，表明中药组和西药组对动物行为均有明显改善作用，中药组效果与西药组相仿。
22各组治疗前后脑组织da、ne含量变化比较表2结果显示：模型组脑组织da水平降低，ne水平升高，与空白组比较差异均有显著性意义(p<001);治疗14d后，中、西药组均可显著升高da水平，降低ne水平，与模型组比较差异均有显著性意义(p<005或p<001)，中药组作用与西药组相仿。表1各组治疗前后运动行为和刻板运动积分比较(x±s) 表2各组治疗前后神经递质水平比较
3讨论
idpn是一种中枢神经毒素，50年代以后就用于神经病理学的研究，本研究参考wakata[3]的方法复制模型，从神经生物学和行为学两方面观察药物治疗对ts模型动物临床行为学典型特征的影响。idpn诱发ts模型大鼠出现明显刻板运动和运动行为异常，如过度兴奋、探究行为、异常跑跳、旋转行为和头颈部上下侧摆等动作均具有ts临床行为学的典型特征，有时出现连续的嗤鼻、抬举上肢等动作，类似于人类ts患儿喉部发声、耸肩等特征行为。本研究通过对药物治疗前后ts模型大鼠运动行为和刻板运动行为评分的比较，发现中药组在改善动物ts典型特征行为方面效果明显，如头部、颈部的抽动减轻，旋转行为明显缓解，每次异常行为发作持续时间缩短，异常抽动次数消失，异常跑动及不规律的弹跳运动明显减少。
虽然目前对ts的神经生物学物质基础还未完全阐明，但基本认为中枢神经递质，特别是da、ne、5-羟色胺(5ht)等与ts之间关系密切[5]，因此，探讨大脑多巴胺类神经递质及其代谢产物的水平是证明药物神经生物学疗效的主要依据。本研究对大脑海马区da和ne水平进行测定，结果表明：治疗后中药组da水平明显升高，而ne水平有所下降，均趋向于正常水平。与ts有关的神经递质包括乙酰胆碱、肾上腺素、5ht、多巴胺等，主要分布于纹状体、隔区、蓝斑、黑质等海马、基底前脑及边缘系统，构成复杂的神经网络[6-8]。有关药物治疗对大脑组织不同部位和核团神经递质水平的影响文献报道并不一致，而且与检测时间点有很大关系[8]。本研究结果初步表明，中药治疗14d后，对大脑组织da和ne两种神经递质水平的变化产生显著影响，对于治疗过程中以及停药后神经递质的动态变化仍需进一步观察。
益智宁神口服液的主要组成为：熟地黄、黄芪、白芍、龙骨、远志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微温，入心、肝、肾经，本品味厚气薄，为补血生精、滋阴补肾之要药，《珍珠囊》曰：“主补血气，滋肾水，益真阴”。黄芪，味甘，性微温，入脾、肺经，质轻升浮，为升阳补气之圣药。可补中气、益元气、温三焦、壮脾阳，选以补脾益气。白芍味苦、酸，性微寒，入肝经，既能养血敛阴，又能平抑肝阳，还能柔肝止痉;而龙骨味甘、涩，性微寒，入心、肝经，专攻平肝潜阳、镇静安神之用，两者搭配，养阴宁心，平肝潜阳。五味子性温，五味具备，酸能收敛，苦能清热，咸能滋肾，温而不燥，既能益气生津，补肾养心，用其养心滋肾安神;远志、石菖蒲有安神益智、化痰开窍之功效。诸药配伍，具有健脾滋肾、平肝熄风、宁神益智、化痰开窍之功效。氟哌啶醇是目前治疗ts的最有效药物之一[9]，疗效确切，但因副作用明显使其临床应用受到限制，通过实验结合临床用药发现，益智宁神口服液的疗效与氟哌啶醇无明显差异，且疗效更加稳定，易为患儿及家属接受。
【参考文献】
[1] freeman r d， fast d k， burd l， et a1.an international perspective on tourette syndrome：selected findings from 3500 individuals in 22 countries[j].dev med child neurol， 2000，42( 7 )：436.
[2]杨丽新.培土抑木法治疗小儿抽动秽语综合征36例[j].浙江中西医结合杂志，2001，11(9)：575.
[3] wakata n， araki y， sugimoto h， et al. idpninduced monoamine and hydroxyl radical changes in the rat brain[j]. neurochemical research， 2000， 25(3):401.
[4]刘智胜.小儿多发性抽动症[m]. 北京:人民卫生出版社， 2002：237-238.
[5]刘师莲，张兆莲，刘贤锡，等. 大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究[j].山东大学学报：医学版，2002，40(5):472.
[6]wong d，brasic j，singer h，et a1.pet imaging of dopamine and serotonin in tourette syndrome[j]. neuroimage，2006，31(4)：162.
篇（10）
临床研究表明，生命早期应激容易导致个体成年后患精神疾病的倾向。例如，幼年时有受虐待经历成年后易出现心境障碍或者易患创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)［1］。Brewin 等［2］研究证明少年时期的精神创伤和受虐待是形成PTSD重要的的危险因素。母婴分离被认为是研究人在幼年时期被忽视和受虐待有效的动物模型。大量相关动物实验研究发现，母婴分离能导致行为学和神经内分泌的异常而出现抑郁和焦虑样反应［3］。这些研究结果表明生命早期应激可能对中枢神经系统发育产生深远而持续的影响，这些影响会导致各种行为学异常和大脑内长时期的生物化学改变。本实验应用母婴分离的动物模型，旨在研究生命早期不良经历对大鼠发育过程中神经行为学的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组
怀孕Wistar雌鼠8只(由中山大学中山医学院实验动物中心提供)。雌鼠生产后在光暗周期为12 h/12 h，光照时间8:00-20:00，温度23±2℃，湿度(52±2)%的条件下饲养。22 d后断奶后每笼4只饲养。22 d后将新生雄性大鼠分为母婴分离组和正常对照组，每组8只。
1.2 主要材料
ZH-ZFT型自发活动实验视频分析系统(安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司)。
1.3 动物模型的复制
母婴分离组在新生鼠出生后的第2~15 d给予每天母婴分离3 h的应激刺激。将新生大鼠小心移出，放进另外准备好的鼠笼里，移至另一临近房间，保持温度在25.0℃±0.5℃，母鼠留在原笼中，仔鼠被带离母鼠3 h后放回母鼠笼中，对照组正常饲养。模型复制均在上午(8:00AM-13:00AM)进行。
1.4 自发活动检测
于仔鼠生后22(PND22)d、60 (PND60)d和90 (PND90)d的相同时间，在安静、四周由全封闭的遮光帘隔离开人及电脑干扰并杜绝参照物的环境条件下进行。观察5 min内大鼠活动情况。
1.5 数据处理
测定值用均数±标准差(Mean±SD)表示，采用SPSS 16.0统计软件分析，组间比较采用t检验。以P
2 结果
母婴分离对大鼠自发活动的影响
22日龄大鼠：
仔鼠出生后第22日龄检测其自发活动。结果显示母婴分离组大鼠自发活动总路程和周边路程较对照组显著增多(P
图1
22日龄大鼠自发活动各路程
60日龄大鼠：
仔鼠出生后第60日龄进行第二次自发活动检测。结果显示，母婴分离组中央路程较对照组明显减少(P
90日龄大鼠：
仔鼠出生后第90日龄进行第三次自发活动检测。结果显示，母婴分离组大鼠自发活动总路程、周边路程、中央时间和周边时间与对照组相比均存在显著差异(P
图2
60日龄大鼠自发活动各路程
3 讨论
人类生命早期应激，是多种精神疾病的重要风险因素，可诱发重性抑郁症、创伤后应激障碍、儿童注意缺陷症及精神分裂症等疾病。关于其致病机制的研究，目前主要采用动物模型是应用于啮齿类动物的母婴分离模型，因其符合人类生命早期母子分离的特征，得到广泛应用。
自发活动(Animal Locomotion)试验是观察实验动物在自然状态下的活动情况，在神经精神药理学、行为药理学和毒理学等各个领域得到广泛的应用。有些研究认为动物在自发活动实验中出现自发活动的减少，尤其是中央区域探索活动的减少，提示动物表现为抑郁样行为。也有研究表明，在自发活动实验中动物活动的增加，尤其是周边区域活动的增多，反映动物处于焦虑恐惧状态。Platel等研究认为，动物若重复暴露在同一环境中，会出现对该环境的习惯化，从而表现在第二次重复试验中表现为自发活动的减少，而且在第二次重复实验中动物的活动路程越少，表明其记忆能力越好。本实验结果显示，22 d母婴分离组大鼠在表现为自发活动总路程和周边路程较对照组显著增多，90 d剥夺组大鼠总路程、周边路程和周边时间明显增加，中央时间明显少于对照组。我们认为母婴分离应激诱发了大鼠的焦虑样和抑郁行为。
综上所述，出生后经历生命早期应激会影响个体的神经发育，导致发育过程中及成年后行为活动能力的受损。
参 考 文 献
篇（11）
二、培养科学精神
1.阐明科学影响
将科研成果及其对人类文明的影响纳入教学内容中，并介绍学科中与当前国计民生密切关联的知识。例如，对动物学习行为的了解有助于动物管理，动物的调教多是操作式条件学习的过程，这就必须控制行为和奖惩的时间间隔，研究表明在小马咬人30秒后再惩罚无济于事，却会增加其对人的恐惧，充分利用幼畜的模仿学习也可以更快速有效的进行调教。利用动物探究行为的特点可以开发相应的养殖器械，不同动物的专门饮水器便是最典型的应用。通过科学应用的讲述可以使学生了解科学与人类社会生产和生活的密切关系及其重大作用，激发学生对科学的兴趣和造福人类与社会的热情。科学对社会既有正面作用也有负面影响。例如，育种科学的进步使人工选择的进程大大快于自然选择，特别是分子遗传工程的发展使动物承受极高强度的选择压力，而育种过程中育种目标和生物适应度的不一致使得动物环境应对能力下降，一些行为甚至出现异常，例如雄性火鸡的能力下降、高产蛋鸡的孵化行为减弱、高瘦肉率的皮特兰猪应激增多、高产奶牛的互吮癖等。教学过程中应引导学生反思科学对自然和社会带来的危害，使学生注意科学应用的社会后果，引导学生形成正确的科学道德观，树立社会责任感。
2.再现科研历程
科学发展历程是不断修正错误、走向真理的过程，也是无数人付出的过程。关于蜜蜂是色盲的说法曾经一度流行，有人在实验室用变换颜色的灯对蜜蜂辨别颜色的能力做了实验，发现无论颜色如何变化，蜜蜂总是飞向较亮的一边，于是认为蜜蜂只能分辨光的强弱，不能分辨颜色。但动物学家卡尔•冯•弗里希对这一结论持怀疑态度，他在自然环境中对正在采蜜的蜂作了实验，而且他用的不是灯，而是带有各种颜色的纸板和不同色调的灰色纸板。结果发现：采蜜的蜂对颜色是产生反应的，特别是对黄色和蓝色。之所以会得出不同的反应，是因为出于逃生动机实验室内的蜜蜂只会对光的强度产生反应，所以飞向较明亮的地方，而采蜜的蜂对颜色产生兴趣则是采蜜动机的作用。弗里希对蜜蜂研究的最著名成就是蜜蜂的舞蹈语言，尽管很多人都难以相信蜜蜂具有这么奇妙的沟通能力，在生物界争论多年后，最终证明他的发现是正确的，他也因此获得诺贝尔奖。但对于蜜蜂舞蹈的重要性现在仍有争议，克里斯托弗•格鲁特等最近的研究发现，在和找到食物的蜜蜂一同跳舞的那批蜜蜂中有93%的蜜蜂未能理解这只蜜蜂表达的有关食物的信息，而是飞到有其他食物来源的地方。事实上，在很多情况下，蜜蜂通常都无法搞懂跳舞的蜜蜂所传递的信息。有些蜜蜂甚至看了超过50遍的舞蹈，并且几进几出蜂巢，但最终还是未能找到食物。而以前有关蜜蜂摇摆舞的多数实验都是在非自然条件下实现的，外部环境很单一，因而蜜蜂舞蹈的表现也很简单。毋庸置疑，摇摆舞对蜜蜂传递而言确实起着一定作用，但其真实的效果尚需进一步的研究来确定。科学发展历程是不断修正错误、走向真理的过程，也是无数人付出的过程，对科研历程的了解有助于学生真正理解实事求是、敢于批判、甘于奉献、勇于探索的精神是科学发展的动力。
3.突出科学美学
科学本身就蕴涵了美，科学因其逻辑力量的内在和谐、理论架构的奇妙想象而具有极大的美学力量。行为学由于动物的多样性，其中更是蕴含着力量之美、运动之美、情爱之美、和谐之美，等。例如，大部分幼年动物，不管哺乳动物还是鸟类，大都有共同的面部特征：短脸、宽额、大眼和圆鼓鼓的双颊，因为这些视觉刺激可以激发母，这体现了动物的关爱之美；幼畜之间及母子之间的游戏行为则体现了和谐之美；雄性动物的领地保护行为体现的则是力量之美；雄鸟求偶炫耀的巢则体现了一种精益求精的巧妙之美。当然，不仅动物行为本身是美的体现，科学探索的过程也是对完美的追求，通过突出科学中的美学可以将学生吸引到这一充满情趣的殿堂，激发学生投身科学的兴趣。
三、塑造健全人格
1.完善教学方式
重视学生的主体性，摒弃灌输式授课，教学过程中不断改进教学方式以起到很好的人文教育效果。例如，启发式教学可以调动学生的主动性，培养学生独立思考和解决问题的能力；探究式教学以学生为主体，通过学生自觉地、主动地探索，掌握认识和解决问题的方法和步骤，使学生的主体地位、自主能力都得到加强；讨论式教学使学生始终处于“问题-思考-探索-解答”的积极状态，因学生看问题的方法不同，会有不同的观点，并展开讨论，从而在不同角度来揭示科学的内涵和基本规律可以培养学生的质疑精神和创新精神。通过课堂分组讨论和课下布置团队型作业，可以培养学生的团队精神、合作精神和奉献精神。不同的教学方式，可以对学生人文精神的培养产生不同的作用。
2.营造民主课堂
营造一个良好的课堂氛围，可以起到潜移默化的人文精神培养作用。通过多样化的教学方式实施还有助于营造一种平等、和谐、民主、宽容、打破权威的课堂氛围，让学生去感受、体验，既有助于学生产生对科学的热爱和兴趣，也接受了蕴含着人文精神的专业教育，养成了活泼、宽容的品行，强化了民主、自由精神，人文随知识渗透到了学生的人格中。同时，通过大量的人文知识和实践案例激发学生的兴趣，可以有效地活跃课堂气氛，充分的课堂讨论也能激发学生的注意。活跃的课堂气氛既有助于学生的学习和记忆，也有利民主课堂氛围的形成。
3.加强人文关怀
加强人文教育，更要在教学中体现人文精神，坚持以人为本的原则，要求学生树立以人为本的思想。以人为本，就是对人的尊重、信任和关心，把最大限度地实现人的价值和自由作为教育的目的，一切为学生的发展服务。在教学过程中把学习的主动权交给学生，而不是把学生当作加工的原料；为学生的学习起到引导作用，而不是指导，尊重学生的主体性；高度重视学生的个性差异，切实做到因材施教；树立为学生服务的思想，关心学生的学习和生活，尽可能为学生提供帮助。
