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[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)07(a)-033-03
2型糖尿病(T2DM)合并高尿酸血症日益增多,且随着糖尿病病程进展,高尿酸血症所占比例逐渐升高。为探讨糖尿病合并高尿酸血症的相关影响因素及与糖尿病肾病(DN)的关系,现将我院110例T2DM患者的资料分析如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2009~2010年门诊及住院T2DM患者110例(糖尿病组),均符合1999年WHO糖尿病病诊断标准且除外急慢性肾损害的各种疾病。根据Mogensen分期,早期DN(Ⅲ期)实验室的诊断标准:尿微量白蛋白(mAlb)/肌酐(Cr)30~300 μg/mg。依据尿mAlb/Cr水平将糖尿病组患者分为3个亚组,A组:正常白蛋白尿组(即糖尿病无DN组),尿mAlb/Cr30 μg/mg;B组:微量白蛋白尿组(即糖尿病早期DN组),30 μg/mg≤尿mAlb/Cr300 μg/mg;C组:临床白蛋白尿组(即临床DN组),尿mAlb/Cr≥300 μg/mg。另选取同期30例健康体检人群作为对照组,均排除高血压、糖尿病及其他急慢性肾损害的各种疾病。糖尿病组三个亚组之间及与对照组年龄、性别构成比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性,见表1。
1.2 方法
所有研究对象均测量身高、体重,计算体重指数(BMI)。实验前日晚餐为清淡饮食,禁食8~12 h,空腹采集静脉血检测血糖、总胆固醇(TC)、三酰甘油TG)、血肌酐(SCr)、血尿酸(SUA)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)等。计算肌酐清除率(CCr)。CCr作为肾小球滤过率的计算方法:CCr(ml/min)=(140-年龄)×BMI(kg/m2)/[72×SCr(mg/dl)],女性×0.85。血葡萄糖测定采用葡萄糖氧化酶法,放射免疫法测定胰岛素,散射比浊法测定HbA1c,血脂、尿酸测定应用全自动生化分析仪(日本日立7600-110型)。
检测当日收集患者晨尿,取10 ml备用,尿mAlb测定采用免疫比浊法(北京利德生化技术有限公司),变异系数
1.3 高尿酸血症诊断标准
男性及绝经后女性SUA>420 μmol/L,绝经前女性>350 μmol/L。
1.4 统计学方法
采用SPSS 11.5统计软件处理。计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。计数资料比较采用χ2检验,两因素间的相关性采用Pearson相关分析,多因素分析采用多元线性逐步回归分析。P
2 结果
2.1 各组高尿酸血症发生率比较
对照组高尿酸血症有3例,占10.0%;糖尿病组高尿酸血症有30例,占27.2%。其中,A组5例,占12.5%;B组11例,占28.2%;C组14例,占45.2%。糖尿病组合并高尿酸血症比例高于对照组,对于糖尿病组,随着DN病程进展,高尿酸血症比例逐渐增高。C组与对照组、A组比较,差异有统计学意义(P=0.007和P=0.026),而C组与B组、B组与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2 临床生化指标比较
糖尿病组3个亚组与对照组HbA1c比较差异有统计学意义。C组BMI、TC、TG、SCr、CCr、SUA分别与对照组、A组及B组比较差异有统计学意义,而B组和A组BMI、TC、TG、比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组与A组仅HbA1c、FINS比较差异有统计学意义,SUA降低,CCr却上升。见表1。
2.3 SUA与各因素之间的相关性
将110例糖尿病患者作为整体进行Peason相关分析,SUA与HbA1c、BMI、mAlb/Cr、TG、SCr呈正相关(r=0.257,P
2.4 多元线性逐步回归分析
以糖尿病患者SCr、CCr、HbA1c、mAlb/Cr、TG、BMI为自变量,以SUA为应变量,进行多元线性逐步回归分析,发现TG、BMI和CCr是SUA的独立相关因素,其中TG和BMI与SUA呈正相关,CCr与SUA呈负相关。HbA1c、mAlb/Cr、SCr提示有促进作用,但差异无统计学意义。见表2。
3 讨论
高尿酸血症是一种嘌呤代谢障碍性疾病,其发病与饮食、高血压、脂代谢紊乱、肥胖、胰岛素抵抗等有关,被认为是代谢异常的一种标记,共同的影响因素造成高尿酸血症和2型糖尿病并存的可能性较大[1],因此高尿酸血症可作为糖尿病慢性并发症的危险因素和预告因子。在合并高尿酸血症的T2DM患者中,DN的发病率显著高于不合并高尿酸血症者。T2DM高尿酸血症发病率在不同的研究中差异很大[2],考虑与地区、种族、遗传背景、生活习惯等因素有关,本研究T2DM患者中高尿酸血症发病率为27.2%,这与国内同样一些研究结果相似[3]。本研究证实,随着DN的发展,高尿酸血症发病率逐渐上升,且临床DN组分别较对照组及糖尿病无DN组显著增高,差异有统计学意义。
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T2DM患者中高尿酸血症发生的机制可能为:T2DM患者多存在肾微血管病变,导致肾缺血、肾血流下降,尿酸排泄减少,故随着DN发展,高尿酸血症发病率逐渐升高;其次,高胰岛素血症可促进肾小管对钠和尿酸的重吸收,表现为影响近端肾小管尿钠排泄,抗尿钠排泄的同时,肾脏排尿酸减少,从而造成高尿酸血症。在糖尿病高尿酸血症的形成中,肾脏因素起主导作用,所有高尿酸血症患者肾脏尿酸的排泄功能均受损。肾小管损伤在前且严重,肾小球损害在后,因此,DN伴高尿酸血症者,其肾脏受双重损伤,故肾功能损害程度较糖尿病无高尿酸血症者更严重。
本研究结果表明,随着DN的发展,CCr下降,SUA增加,SUA与CCr呈负相关,而在糖尿病无DN组,出现CCr增加,SUA下降的相反情况,分析可能是由于T2DM早期存在高灌注、高滤过状态引起,而高灌注是DN病变的主要机制。在我国的应用研究中CCr的敏感性高于SCr及24 h CCr,基本能反映肾功能[4]。糖尿病合并高尿酸血症者的CCr高于正常尿酸者,说明肾功能影响尿酸的排泄,而高尿酸血症也影响肾功能。
对3 153名日本成人健康体检并追踪2年发现,绝经后女性和男性体重指数(BMI)与血尿酸水平呈正相关[5]。研究表明,皮下型肥胖多伴有血尿酸排泄减少,而腹型肥胖者大多为血尿酸合成亢进[6],其机制可能是:T2DM患者多伴肥胖,特别是内脏脂肪的蓄积,因内脏脂肪具有较强的脂肪生成与脂解作用,产生大量的游离脂肪酸,后者通过门静脉被肝脏摄取,在肝脏酰基辅酶A合成酶的作用下,合成过多的低密度脂蛋白,导致高三酰甘油血症。这会导致甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性降低和3-磷酸甘油醛脱氢酶代谢延迟,使NADP-NADPH介导的由5-磷酸核糖向磷酸核酸焦磷酸(PRPD)进行的从头合成系统亢进,导致三酰甘油的合成及尿酸产生亢进[7]。另外长期的脂代谢紊乱可使出入肾小球小动脉管腔狭窄甚至闭塞,加上脂肪酸合成增加致酮体增多,均可使肾脏清除尿酸减少,SUA水平增高,与本研究SUA与TG、BMI呈正相关相符合。T2DM易出现脂代谢紊乱,而脂代谢异常亦加重糖代谢紊乱,并产生对DN的影响[8]。
综上所述,高尿酸血症、高血糖、高血脂、肥胖等因素相辅相成,互为因果,所以糖尿病高尿酸血症可能参与了糖尿病并发症的发生、发展。对于糖尿病患者应注意监测SUA,控制SUA,有利于预防DN的发生。
[参考文献]
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[2] 骆毅,刘文仲,崔志刚,等.保定地区2型糖尿病伴发高尿酸血症的患病率调查[J].中国糖尿病杂志,1997,7(3):159-160.
[3] 张晓青,宗成国,栾旭华,等.糖尿病肾病血尿酸与血脂及肌酐清除率的关系[J].中国医师进修杂志,2010,33(12):1-3.
[4] 霍丽丽,纪立农.血清尿酸水平与糖代谢状况及肌酐清除率的关系[J].中国糖尿病杂志,2008,16(12):732-734.
[5] Ishizaka N, Ishizaka Y, Toda A, et al. Changes in waist circumfer-ence and body mass index in relation to changes in serum uricacid in Japanese individuals [J]. J Rheumatol,2010,37:410-416.
[6] Yamasaki T, Tomita K. Relationship between hyperuricemia and metabolic syndrome [J]. Nippon Rinsho,2008,66:766-770.
[7] 周新雨,刘艺昀,倪银星,等.高尿酸血症与腹型肥胖的关系[J].国际内分泌代谢杂志,2010,30(增刊):61-63.
实验材料:①实验动物:健康SD雄性大鼠,体重200g±10g。②实验药品:附子,附子煎剂制法:取适量附子饮片用清水浸泡05小时后,煎05小时,分别煎2次,所得药液合并后再煮沸浓缩至1ml相当于生药1g(原液)。阿霉素粉针剂。
实验分组及给药方法:①实验分组:造模大鼠采用随机数字抽样法分为四组,即模型组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,每组10只,另设正常对照组10只。②给药方法:在第1注射ADR后的次日,各治疗组开始灌胃不同浓度附子煎剂,1次/日,连续8周,高、中、低剂量组的剂量分别相当于成人用量的90g、60g、30g,剂量按动物和人的等效计量换算灌胃量[1],模型组和正常组予2ml蒸馏水灌胃,1次/日,连续8周。
结 果
各组大鼠的一般情况:造模组40只大鼠于第1次注射ADR后与正常组相比,出现不同程度的饮食减少、体重减轻、体毛零乱无光泽、腹泻、阴囊水肿等现象,以模型对照组现象最为显著。在实验过程中,肾病模型组有3只鼠死亡,低剂量组有两只鼠死亡,中剂量组有1只鼠死亡,高剂量组有1只鼠死亡,死亡大鼠均有阴囊水肿及消瘦明显的现象。
讨 论
目前,大量体外研究表明,蛋白尿具有潜在的肾毒性,即尿蛋白的系膜毒性和对近曲小管的毒性作用。因此蛋白尿是导致肾小管间质损伤以及加速肾功能恶化的重要因素,而高脂血症可对肾小球及肾小管间质造成损伤。MCD中有肯定意义的细胞因子有IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF、可溶性免疫应答抑制物、血清可溶性IL-2受体(SIL-2R)等,这些因子可能通过单一或协同效应对肾小球固有细胞产生毒性作用或影响肾小球基底膜蛋白的多糖代谢,导致肾小球通透性增加,产生蛋白尿。TNF-α是一种由巨噬细胞和活化的单核细胞产生的细胞因子,肾小球系膜细胞,血管内皮细胞,肾小管上皮细胞亦可合成和分泌,其在介导肾脏炎症、肾纤维化、加剧肾损伤的病理过程中起着重要作用。TNF-α促进炎症细胞聚集、浸润,刺激肾小球系膜细胞合成 TGF-β,引起纤维蛋白沉积于肾小球。在本实验中,模型组中TNF-α浓度较正常组明显升高,且具有统计学意义。推测附子的作用机制可能是通过降低尿蛋白、血脂,减轻二者对肾脏的直接损害,抑制肾脏及血浆中单核巨噬细胞的浸润,减少巨噬细胞产生TNF-α,改善肾脏血液灌注,从而改善肾脏的病理变化。
参考文献
实验材料:①实验动物:健康SD雄性大鼠,体重200g±10g。②实验药品:附子,附子煎剂制法:取适量附子饮片用清水浸泡05小时后,煎05小时,分别煎2次,所得药液合并后再煮沸浓缩至1ml相当于生药1g(原液)。阿霉素粉针剂。
实验分组及给药方法:①实验分组:造模大鼠采用随机数字抽样法分为四组,即模型组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,每组10只,另设正常对照组10只。②给药方法:在第1注射ADR后的次日,各治疗组开始灌胃不同浓度附子煎剂,1次/日,连续8周,高、中、低剂量组的剂量分别相当于成人用量的90g、60g、30g,剂量按动物和人的等效计量换算灌胃量[1],模型组和正常组予2ml蒸馏水灌胃,1次/日,连续8周。
结 果
各组大鼠的一般情况:造模组40只大鼠于第1次注射ADR后与正常组相比,出现不同程度的饮食减少、体重减轻、体毛零乱无光泽、腹泻、阴囊水肿等现象,以模型对照组现象最为显着。在实验过程中,肾病模型组有3只鼠死亡,低剂量组有两只鼠死亡,中剂量组有1只鼠死亡,高剂量组有1只鼠死亡,死亡大鼠均有阴囊水肿及消瘦明显的现象。
讨 论
目前,大量体外研究表明,蛋白尿具有潜在的肾毒性,即尿蛋白的系膜毒性和对近曲小管的毒性作用。因此蛋白尿是导致肾小管间质损伤以及加速肾功能恶化的重要因素,而高脂血症可对肾小球及肾小管间质造成损伤。MCD中有肯定意义的细胞因子有IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF、可溶性免疫应答抑制物、血清可溶性IL-2受体(SIL-2R)等,这些因子可能通过单一或协同效应对肾小球固有细胞产生毒性作用或影响肾小球基底膜蛋白的多糖代谢,导致肾小球通透性增加,产生蛋白尿。TNF-α是一种由巨噬细胞和活化的单核细胞产生的细胞因子,肾小球系膜细胞,血管内皮细胞,肾小管上皮细胞亦可合成和分泌,其在介导肾脏炎症、肾纤维化、加剧肾损伤的病理过程中起着重要作用。TNF-α促进炎症细胞聚集、浸润,刺激肾小球系膜细胞合成 TGF-β,引起纤维蛋白沉积于肾小球。在本实验中,模型组中TNF-α浓度较正常组明显升高,且具有统计学意义。推测附子的作用机制可能是通过降低尿蛋白、血脂,减轻二者对肾脏的直接损害,抑制肾脏及血浆中单核巨噬细胞的浸润,减少巨噬细胞产生TNF-α,改善肾脏血液灌注,从而改善肾脏的病理变化。
参考文献
2.中医病因病机分析:本病病理因素为湿热蕴结。病位在肝胆,累及脾胃,脾主运化而恶湿,外感湿热疫毒之邪,致脾胃功能受损。脾胃升降失常,脾气不升,胃气不降,则食纳差;脾失健运,水湿不化,湿邪壅阻中焦,郁久化热,湿热蕴结,阻滞肝络,则胁肋作痛;湿热蕴结肝胆,则胆汁的输送排泄失常,导致胆汁侵入血液,溢于肌肤,因而身目发黄。
3.治疗方法:治疗开始第一个月给予苦参素注射液(天晴复欣注射液,江苏正大天晴制药有限公司)100 mL,静脉滴注,每日1次。中药基本方为茵栀清肝汤:茵陈25g、栀子10g、制大黄6g、 炒枳实6g 、赤芍30g 、白芍10g、丹参10g 、虎杖15g、叶下珠20g、垂盆草30g、白花蛇舌草30g、炒白术10g、田基黄30g 、五味子10g、鸡骨草15g 、太子参15g酌情随证加减。开水煎服,每日一剂,分早晚服。一个月后改服苦参素胶囊(天晴复欣胶囊,同上),继续原中药方煎服。三个月后患者上述不适主诉基本消除,复测肝功能:ALT :52 U/L,AST :48U/L,TbiL:12.8 μmol/L,A/G:39/26.5,肾功能正常,HCVRNA 5.1e+10 4cps /ml。
中药调整为茵陈减为15g、垂盆草减为15g、赤芍减为15g,因大便偏稀,停大黄。治疗半年、九个月后两次复查肝功能均基本正常,HCVRNA 分别为7.2e+10 2cps /ml,
4.疗效评定标准
参照2002版《中药新药临床研究指导原则》及2000年9月西安全国肝病会议制定的《病毒性肝炎防治方案》中有关慢性丙型肝炎的疗效标准:自觉症状消失,肝脾肿大稳定不变或缩小,肝区无压痛及叩击痛,肝功能检查正常,HCVRNA阴转,以上各项指标稳定6月以上。
5.讨论:
由于肾移植术后早期应用的免疫抑制剂的不完全细胞免疫抑制,使机体对病毒抗原的异己识别清除能力下降,致使丙肝病毒得以大量复制,并且与肝细胞整合在其表面表达病毒抗原导致杀伤性细胞持续损伤肝细胞,但此时肝脏依靠自身的代偿能力维持着在病毒损伤和自身代偿之间的平衡,因此肾移植术后早期患者的肝功能尚处于稳定状态,一旦超过机体的代偿极限,在诱发因素如感染等出现时,动态平衡被打破,会迅速进入肝功能衰竭状态,并可伴发或加重移植后并发症,从而造成受者的死亡。同时,免疫抑制药物本身的毒副作用也加重了对肝脏的损害。因此,针对此类人群HCV感染的治疗尤为重要。
本病证属肝著之肝胆湿热证。中医认为湿热、疫毒为基本病理变化,而临床中又以湿热蕴结,郁久不解,阻滞肝络,肝脾失调为最主要病理转机。故丙肝病人多见有舌苔黄腻消退缓慢,转氨酶易持续增高或反复波动等湿热疫毒胶着难解之病象。针对以上病理特点,笔者采用具有清热化湿解毒,疏肝理气止痛作用的茵栀清肝汤为治疗主方。是方以茵陈、大黄、栀子、虎杖、白花蛇舌草、叶下珠等清热解毒湿热,田基黄、垂盆草、鸡骨草、五味子降酶。已有药理研究表明,该类药既能抑制和清除肝炎病毒,又能降低血清转氨酶活性,减轻肝细胞变性坏死,促进再生修复;赤芍、丹参、枳实、白芍、白术疏肝活血理气止痛,软肝散结,促进肝脏微循环和蛋白合成,降解胆红素,抑制肝组织纤维增生。太子参具有提高细胞和体液免疫,诱生干扰素等作用,诸药配合,则湿热清,疫毒消,气血畅,肝脾调。而苦参素又名氧化苦参碱,是从豆科植物苦参根中提取的生物碱,在大量的药理和临床研究中发现,其具有抗炎、抗病毒、抗肝纤维化和保肝降酶、抗癌、升高白细胞、抗心率失常等多种药理作用,且不良反应较少,已被广泛用于治疗病毒性肝炎。该种联合治疗方案具有类似于现代医学抗病毒、免疫调控、恢复肝功能等综合治疗作用,且无明显副作用,治疗显效,患者对目前治疗效果满意,我们还在观察随访中。
参 考 文 献
[1]中华医学会传染病与,寄生虫病学分会,肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案[J]. 中华肝脏病杂志, 2000,(06) .
[2]谢尧,范小玲,杨松. 慢性丙型肝炎抗病毒治疗专家共识[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2009,(03) .
[3]陈文林,陆坚,李炜,李卓家,吴其恺. 慢性丙型肝炎中医证候量表分析[J]. 山西中医学院学报, 2010,(01) .
二 其他班主任的做法
A老师每年都是先让学生写申请书,然后根据学生申请书中所描述的家庭困难程度亲自筛选出应受助的学生。但是这种做法的弊端是那些没有入选的学生会认为老师“暗箱”操作,老师根据自己的好恶或学生的成绩来筛选受助对象,这种方法缺少公开透明的程序。虽然老师凭着一颗公心去做这件事,但是往往事与愿违,很容易被学生误解。
B老师的做法是先让全体学生投票,选出家庭最困难的学生,然后再让这些被选上的同学写救助申请。这种做法的弊端是:这些被选出来的同学无疑会被认为是这个班里家庭最穷的人,就相当于给这些同学扣了个贫穷的“帽子”,对他们的自尊心是个不小的打击,有的同学被选上后并不愿意写申请书。
C老师的做法是让学生先写申请书,然后在班内宣读或张贴出来,再让全体学生投票选出应受助学生。这种做法也有弊端。这些学生家庭贫困的原因往往都是因为单亲、父母亲患有重大疾病或家庭突然遇到变故等。他们往往自尊心很强,并且有些学生不希望让班内更多的人知道自己的家庭状况。教师的这种公示的做法虽然看起来公开透明,但是无异于在这些贫困生的伤口上撒盐一样,让他们以后在班级内抬不起头来。家庭贫困并不是他们的错,他们申请助学金的出发点也是为了给父母减轻一些负担,作为老师应保护这些同学的自尊心。
D老师的做法是让学生写申请书,然后找来班干部当评委进行评审。这种做法同样也存在问题。首先班干部成员之中可能有同学也申请了助学金,如果不进行“回避”的话,结果会缺乏公信力。另外,写申请的学生很多,但是真正入选受助的学生很少,让班干部阅读全部学生的申请书同样面临着泄露申请者家庭隐私的风险。
三 笔者的做法
怎样才能做到让评审的学生不知道申请者身份的同时还能客观公正地筛选出最应当受助的学生呢?
我想到了论文评审中的“双盲评审法”。论文的双盲评审就是首先把论文的作者信息进行处理,使其在文章中不能显现出来,然后找到相关专家匿名对论文进行评审,评审者和论文作者双方都不知道对方是谁。这样就能在一定程度上排除感情因素对评选结果的影响。
第一步:要统一申请书的书写格式。老师要求所有想要写救助申请书的学生采用相同的纸张和统一的格式书写申请书,在申请书的内容中不能带有本人姓名和家庭住址等个人信息,仅在申请书的最后一行附上申请人的姓名。
第二步:把申请书进行排序和编号。班主任分别在每份申请书的题目处和姓名处标上同一序号,然后再把姓名部分裁下来,这样就做好了若干份只带有编号的申请书,而且每个编号都对应着一位申请者的名字。
第三步:推选评审小组成员。让班内的所有同学共同推选出没有写助学申请的6位同学作为评审小组的成员。评审小组成员的组成,首先要保证所有成员都没有写助学申请,其次在男女生比例上各占一半,班干部和普通学生各占一半。按照这些原则推选6位同学作为评审小组成员。
第四步:评审小组商讨评选标准。6位同学经过讨论确定如下评选标准和流程。首先把所有申请者根据申请书的内容划分成ABC三个层次。A层的申请者属于最应受助的人员,如单亲家庭或父母有重病等。B层的申请者属于不好确定困难程度的。C层的申请者家庭只是暂时困难或困难程度不严重,属于最不应受助者。每个层次的人数各占三分之一。
【Abstract】 Objective:To observe the effect of cordyceps on tubular injury in diabetic rats, and explore whether the reno-protective action has a close relationship with anti-oxidation and anti-aging.Method:The rats were induced into diabetes mellitus (DN) by intraperitoneal injection of streptozotocin(STZ).They were randomly divided into four groups:the namely control group,the cordyceps group,the DN group,the DN+cordyceps group.At the 24th weeks,the protein expression of Klotho mRNA level in tubule and levels of GPx,SOD,MDA,ROS in renal cortex were studied.Scr,BUN,urinary albumin,UACR and Ccr were also investigated.Result:Compared with the control group,renal function was decreased obviously in DN group.The Klotho protein and mRNA levels were also decreased,but renal oxidative stress was increased.However,cordyceps treatment could significantly improve the renal function,increase the SOD and GPx levels,the protein and mRNA expression of Klotho,but lower the MDA and ROS levels.Conclusion:Cordyceps sinensis can delay the progress of DN,its mechanism may be associated with renal tubular interstitial play a role of the antioxidant and anti-aging.
【Key words】 Cordyceps; Diabetic nephropathy; Oxidative stress; Klotho
First-author’s address:Institute Nephropathy,Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524000,China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2014.22.005
大量研究表明,DN其实是典型的衰老相关性疾病,肾脏多种固有细胞的衰老和功能减退(对抗损伤的应激能力减弱)是DN各种病理损害加速进展的重要原因[1-2]。Klotho基因是近年来新发现的抗衰老基因,其在肾小管间质高表达,提示它在肾脏疾病的发生和发展过程中很可能发挥着重要的调控作用。冬虫夏草在肾脏疾病中的应用日益广泛,对肾衰竭、糖尿病肾病、慢性肾炎、马兜铃酸肾病等均可起到良好的肾保护作用[3-4]。本研究拟通过动物实验观察冬虫夏草对DN大鼠肾小管Klotho基因、氧化指标(MDA、ROS)及抗氧化指标(SOD、GPx)表达的干预情况,从而探讨冬虫夏草是否在DN状态下通过抗氧化及抗衰老对肾脏起到保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性SD大鼠40只,周龄5~7周,体重180~200 g,购自Damool Science。
1.2 实验药品 冬虫夏草粉,由杭州中美华东制药有限公司提供;链脲佐菌素,购于Sigma公司;SOD试剂盒、GPX试剂盒、MDA试剂盒购于Cayman Chemical公司;ROS试剂盒购于eBioscience公司;western-blotting检测试剂:兔抗Klotho抗体,购于Abcam公司;山羊抗兔IgG-HRP二抗,购于美国Santa Cruz公司;实时PCR检测试剂盒:TRIzol 试剂和RNase-free Dnase试剂盒购于Invitrogen公司。
1.3 造模方法与动物分组 SD大鼠给予溶解于柠檬酸盐缓冲液链脲佐菌素(60 mg/kg)一次性腹腔内注射建立糖尿病肾病大鼠模型,对照组给予相同计量的柠檬酸盐缓冲液一次性腹腔内注射。将确诊为DN的大鼠(血糖>300 mg/dL进入本实验)随机分为两组,非DN大鼠(对照)也随机分为两组,即:对照组,给予饮用水2 mL/只灌胃;冬虫夏草组,给冬虫夏草粉5 g/(kg・d)灌胃,灌胃前以饮用水2 mL配制成悬液制剂;DN模型组,DN大鼠予饮用水2 mL/只灌胃;DN+冬虫夏草组,DN大鼠予冬虫夏草粉5 g/kg/d灌胃;实验周期为24周。
1.4 标本采集 实验第24周分别收集血液及24 h尿标本行尿蛋白、尿白蛋白肌酐比及肾功能检测,检查方法参照笔者已发表的文献[5]。分离肾皮质并根据试剂盒说明检测氧化及抗氧化指标,之后将右肾皮质组织以胶原酶消化及percoll密度梯度离心分离肾小管,用于western-blotting及RT-PCR检测,具体方法如文献[6]所述。
1.5 western-blotting检测 分离的肾小管组织以RIRA裂解液裂解及提取蛋白,BCA法检测蛋白浓度。样品转移到硝化纤维膜上,封闭1 h后,用Klotho一抗在4度过夜,加入酶标的山羊抗兔IgG-HRP二抗作用1 h,加入显影剂显色并用X光曝光。条带以Bandscan 4.0软件进行分析。
1.6 RT-PCR检测 用TRIzol试剂提取肾小管组织RNA,第一条cDNA通过RNA逆转录酶反转录获得。应用ABI Prism 7900HT系列扩增系统进行扩增。每个反应进行3次,平均值除以β-actin的数值后获得每个数值,以正常对照组为1进行比较。Klotho引物:5′-CGT GAA TGA GGC TCT GAA AGC-3′(forward)和5′-GAGCGGTCACTAAGCGAATACG-3′(reverse);β-actin引物:5’CGTGAAAAGATGACCCAGATCA-3’(forward)和5’-TGGTACGACCAGAGGCATACAG-3’(reverse)。
1.7 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),以P
2 结果
2.1 冬虫夏草对大鼠肾功能的影响 DN模型组大鼠与对照组相比,血肌酐、24 h尿蛋白、尿素氮、尿白蛋白肌酐比明显增高(P
2.2 冬虫夏草对氧化应激及抗氧化应激指标的影响 DN模型组大鼠与对照组相比,肾组织ROS和MDA水平均明显增加(P
2.3 冬虫夏草对Klotho mRNA及蛋白表达水平的影响 DN模型组大鼠与对照组相比,肾组织Klotho mRNA和蛋白表达水平均降低(P
3 讨论
DN是糖尿病重要的微血管慢性并发症之一,也是导致终末期肾功能衰竭的主要原因。DN在全球范围内呈上升趋势。因此,对DN早发现早治疗,探寻有效地阻止DN进程的药物仍是肾病工作者的重要任务。有研究证实,氧化应激增强、活性氧簇(ROS)产生增多在DN的发生发展中发挥了重要作用[7]。近年大量研究表明,作为衰老相关性疾病DM的主要并发症之一,DN其实也是典型的衰老相关性疾病[1-2]。冬虫夏草是我国传统中药的瑰宝,具有良好的肾保护作用,但其很多的作用机制尚待进一步明确。有研究表明,冬虫夏草可通过降低DN动物模型肾脏中Ⅳ型胶原水平等抑制肾组织纤维化,减轻肾脏病理损伤,从而在早期DN治疗中发挥重要作用[8-10]。细胞衰老是器官功能乃至整个机体功能衰退的主要表现,肾脏细胞也不例外。有研究表明,冬虫夏草菌丝体能促进机体体液免疫功能、增强机体抵抗力以及改善机体功能,从而有助于延缓衰老[11]。
Klotho是新发现的与人类衰老密切相关的基因,主要表达于肾脏和大脑脉络膜中,尤以肾小管上皮细胞表达最为明显[12]。随着研究的深入,有研究表明,Klotho可以发挥很多生物学功能,如抗氧化、抗凋亡、抗衰老以及对抗组织纤维化作用[13-16]。动物实验证实,升高血浆中可溶性Klotho水平可逆转衰老的过程,并通过降低氧化应激反应发挥对心肾和其他组织的保护作用[13-16]。基于上述发现,本研究通过DM大鼠模型在长期喂食冬虫夏草后,观测其在肾小管间质作用。笔者发现,在冬虫夏草的干预下,DN大鼠肾功能较前有所改善。除此之外,ROS及MDA水平降低,SOD和GPx水平升高,提示冬虫夏草可通过拮抗氧化应激而发挥抗氧化作用,从而减轻肾小管损伤。与此同时,肾小管Klotho表达增加,提示冬虫夏草很可能通过上调衰老相关基因Klotho的表达,延缓肾小管的凋亡。由此,本研究提示,冬虫夏草可通过抗氧化及抗衰老减轻肾小管损伤,从而延缓DN进展。
参考文献
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我于**年10月参加公交公司工作,我非常看好公司的发展前景和本职工作,我决心认真学习,努力工作,为公司的发展作出应有的贡献。
为了保障自己的合法权益,根据《中华人民共和国宪法》和《劳动法》关于参加社会保险的有关规定,特向领导提请为我办理社会统筹的养老保险、医疗保险、失业保险、工伤保险和生育保险的参保手续并履行缴费义务。
特此申请,恳请批准!
申请人:
公司社保申请书范文2敬爱的公司领导: 我于 年 月到贵公司工作,我非常看好公司的发展前景和本职工作,我决心认真学习,努力工作,为 公司的发展作出应有的贡献。 为了保障自己的合法权益, 根据《中华人民共和国宪法》和《劳动法》关于参加社会保 险的有关规定,特向领导申请为我办理养老保险的参保手续 并履行缴费义务。
现申请自愿加入贵公司统一办理的社会养老保险计划,遵守《规定》中的各项条款。
特此申请,恳请批准!
申请人:
申请时间:
公司社保申请书范文3尊敬的公司领导:
您好! 首先感谢公司领导对我的栽培和帮助。 我是一名**,**年 *月进 于 入公司工作,至今已有 X 年。公司的不断发展壮大,我个人的能力也在不断提 升和进步。 由于珍惜并且热爱这份工作, 因此在自己的岗位上, 我一直努力工作, 认真负责。 在此, 特向公司申请给予我购买社保的请求, 希望公司能够批准为盼, 谢谢!
此致 敬礼!
申请人:
公司社保申请书范文4敬爱的公司领导:
我于 年 月到贵公司工作,我非常看好公司的发展前景和本职工作,我决心认真学习,努力工作,为公司的发展作出应有的贡献。 为了保障自己的合法权益,根据《中华人民共和国宪法》和《劳动法》关于参加社会保险的有关规定,特向领导申请为我办理养老保险的参保手续并履行缴费义务。现申请自愿加入贵公司统一办理的社会养老保险计划,遵守《规定》中的各项条款。
2011年度医学科学部重点项目包含按立项领域申请的重点项目和“非领域申请”的重点项目。医学科学部根据优先资助领域,经专家研讨确定重点项目立项领域。“非领域申请”的重点项目主要鼓励已取得重要创新性研究进展而当年的重点项目立项领域未能覆盖其研究领域或方向的医学科技工作者,围绕医学科学前沿开展的基础研究,这类申请可不受重点项目立项领域的限制,申请人可结合自己的工作基础和学科前沿,直接申请重点项目。
有关申请书的撰写、要求和注意事项请参看本《指南》中重点项目总论部分及医学科学部面上项目部分。特别要求申请人在提交的纸质申请书后附5篇代表性论著的首页复印件。对于按立项领域申请的重点项目,申请人根据下列重点项目立项领域,自主确定项目名称、研究内容和研究方案。准确填写立项领域后面所标出的申请代码;附注说明应写明项目申请所属的重点项目立项领域名称。
对于“非立项领域”申请的重点项目,申请人可自主确定项目名称、研究内容和研究方案,自主选择与研究内容相对应的申请代码;基本信息表附注说明栏应选择“非领域申请”字样。此外,“非领域申请”的重点项目除了按常规要求撰写申请书外,还需要在申请书正文部分的最后增加一项800字左右的“关于已取得重要创新性研究进展的情况说明”,在此说明中着重阐述与本次申请密切相关的重要创新性进展的实质性内容、相关研究结果以及在国际重要学术期刊情况等。对于本次申请所依据的“已取得重要创新性研究进展”的代表性论文,要求必须是申请人近期发表的第一作者或责任作者论文。
未按照上述要求撰写重点项目申请书的项目申请,本科学部将不予受理。
医学科学部2011年度计划资助重点项目80项,其中按立项领域申请的重点项目拟占资助计划的80%,“非领域申请”的重点项目拟占资助计划的20%。资助强度约为200万~400万元/项(如特别需要增加资助强度应加以说明,但最高不超过500万元/项,平均约300万元/项),研究期限为5年。请申请人根据工作实际需要合理申请项目经费,除了填写经费预算表之外,还需要写出尽可能详细的预算说明。
2011年医学科学部重点项目立项领域
1.气道慢性炎症性疾病的分子机制(H01呼吸系统)
2.出凝血调控异常及血栓形成的机制及干预(H08血液系统)
3.血管损伤、修复的机制及干预的基础研究(H02循环系统)
4.胃肠道粘膜损伤相关性疾病的机制研究(H03消化系统)
5.肾脏进行性纤维化的发生机制(H05泌尿系统)
6.宫内微环境改变与子代重要疾病发生的关联机制(H04生殖系统)
7.胰岛细胞功能与糖尿病的发生发展(H07内分泌系统)
8.重要致盲眼病的发病机制及眼损伤修复与视功能重建的基础研究(H12眼科学)
9.精神疾病遗传易感性及发病机理研究(H09神经系统和精神疾病)
10.神经电活动异常与发作类疾病的致病机制研究(H09神经系统和精神疾病)
11.多功能造影剂与分子探针的基础研究(H18影像医学与生物医学工程)
12.小动物活体成像的理论方法及基础研究(H18影像医学与生物医学工程)
13.重要人体寄生虫病原学及致病机理研究(H19医学病原微生物与感染)
14.炎症性及免疫性皮肤病的病因及发病机制研究(H11皮肤及其附属器)
15.骨关节退行性疾病发生发展的分子机理(H06运动系统)
16.脓毒症致多脏器损伤的病理生理机制及干预措施研究(H15急重症医学/创伤/烧伤/整形)
17.蛋白质修饰在肿瘤发生发展中的作用(H16肿瘤学)
18.细胞自噬与肿瘤发生发展(H16肿瘤学)
19.肿瘤分子靶向治疗的耐药机制(H16肿瘤学)
20.性激素与肿瘤发生发展(H16肿瘤学)
21.营养素及食物中生物活性物质与慢性病防治的基础研究(H26预防医学)
22.环境与职业暴露人群早期健康损害防治的基础研究(H26预防医学)
23.免疫生物治疗的细胞与分子机制(H10医学免疫学)
24.同种异体移植免疫排异及免疫耐受的基础研究(H24医学免疫学)
25.药物高效传递系统基础研究(H30药物学)
26.胰岛素抵抗与药物干预新靶点研究(H31药理学)
27.重大疑难疾病中医治则治法的基础研究(H27中医学)
本人系高x年级x班学生xxx家长。兹因xxx身患某某疾病,身体虚弱,不能坚持正常的学习。为今后的学习、工作、生活所虑。医生建议休息一年。特此提出休学申请,请学校予以批准同意。
申请人:
申请日期:
附:某某医院证明
大学生因病休学申请书二:
尊敬的老师:
您好!前些日子我感觉到自己胃部难受,在父母的陪同下,我去了**医院,经检查诊断为慢性胃炎(已经很严重,医生说有可能会恶化)。
根据医生的建议,我必须立即接受住院治疗。因为自已身体的原因,导致目前我已经不能正常上课学习,现向校方提出病假申请,请审查批准!
(后附医院诊疗证明材料)
此致
敬礼
申请人:***
*年*月*日
大学生因病休学申请书三:
尊敬的学校领导:
您好!本人系**院校电子系学生。由于前两年就严重失眠,心理严重不适,但我坚持了学习;本以为随着时间的推移,病情会好转。可是到了高三后,情况愈加严重。前段时间在父母的陪同下,我去了人民医院,经检查诊断为抑郁焦虑症、神经衰弱和精神分裂症状。现在身体越来越虚弱,头痛,不能坚持正常的学习。
尊敬的领导:
我叫xx,家住*****(你的情况)。因家庭****(说你的困难),已于**年**月被批准为低保户。
几天前我感到身体不适,去医院检查,诊断为高血压、等病症。由于家庭经济条件所限,低保金只能维持生活,不能进行相应的治疗,而我(写写你对你的家庭的重要性,如果不能及时治疗,延误病情对家庭的后果等困难),特向国家申请医疗救助金。
申请人:
20xx年xx月x日
大病临时救助申请书
xxx人民政府民政办:
申请人:YJBYS,男,壮族,现年55岁,家庭其他成员5人。家住xx镇xx村民委xx小组14号。
本人因患有肺部肿瘤,且引起胸腔大量积液,抽干后又反复发作,先后各在xx医院、xx县中医院、xx县老医院及市医院进行检查治疗。最终在xx州医院确诊为肺部恶性肿瘤。其中除去报销的农村医疗合作费外其开支如下:
首先在xx医院医药费共用去玖佰捌拾元整,合币:980元。
其次在xx县中医药医药费共用去壹仟肆佰肆拾捌元肆角,合币:1448。4元。
再次在xx老县医药医药费共用去贰仟叄佰零柒元玖角,合币:2307。9元。
最后在xx州医药费共用去壹万壹千柒佰叁拾伍元整,合币:11735元。
其间亲属为服侍病人的交通费、住宿费、生活费共用去叁仟陆百元左右,合币:3600元。
病人医药费用总合币:16471。3元。交通护理费用合币:3600元。两项合币:20071。3元。
因本人家庭经济收入非常困难,无力承担本次治病的昂贵的医药费用。其中大部分的治疗费用都是从五亲六戚和朋友中借款筹备治疗的。现无法承担这样的大病医疗费用不得不向医院申请出院回家进行保守治疗。现本人已经欠下了重重债务。其中还有后期的化疗治疗将会开支出更加昂贵的医药费用。
因此,本人特向xx宝镇人民政府民政办申请大病医疗救助,望贵单位给予本人大病的'救助为谢!本人及全家老小对贵单位的帮助将感激不尽!
申请人:
20xx年xx月x日
大病临时救助申请书
尊敬的民政局领导:
我叫____,现年___岁,是____镇____村村民。我家有__口人。
我于_____年___月患了严重的_____方面的疾病,先后在______等城市就医,现已经花去医疗费____多元。目前仍在治疗之中。我还要继续_____,需要大量的钱。眼下我已经向亲戚朋友、街坊邻居借债。下一步该咋办?钱从哪儿来?我真是不敢想象。近段以来,我是以泪洗面,饭吃不下,觉睡不着。在十分困难的情况下,我想到了党,想到了政府,想到了民政局。在此,我大着胆子向民政局提出申请:请求组织上的资助,以帮我继续看病。我不胜受恩感激,我扶老携幼向组织上致谢。
申请人:
20xx年xx月x日
大病临时救助申请书
尊敬的领导:
我是xx市xx街xx社区居民,借住父母家。我父亲由于脊椎折断、并患有糖尿病,退休的薪金还不够吃药药费的开销,糖尿病已到严重时期,不能进食,四肢浮肿,随时都有危险。母亲患有严重的心脏病,加之年岁以高不能操劳。同时家庭收入仅靠老父亲的微薄退休金来维持全家生活。 现在生活举步维艰。
我本人由于长期失业,没有固定的经济来源。一直靠政府的低保补助维持生活,我的妻子也没有工作,只能在照顾父母的空余时间打打零工贴补家用。今年春节我又添了一个女儿,但遗憾的是没有母乳吃,只能靠昂贵的奶粉供养,这一切在我的生活中都无疑是雪上加霜。这真是“屋漏偏遭连夜雨,船迟又遇打头风”。在万般无奈的情况下,希望政府伸出援助友爱之手拉我们全家一把,特恳请困难补助以度过目前的艰难时日。我深信政府会给我们解决实际困难,解决我们的生活危机,向我们伸出援助之手!我们全家期待着您的佳音.
此致
村卫生室效验换证申请书1榆阳区卫生局:
近年来,榆林市城市化建设日益完善,经济发展十分迅速,随着城区不断扩大,人口日渐增多,市区医疗卫生服务方面的资源短缺现象也逐渐显现出来,尤其是在榆阳区长虹北路等方面与人们的医疗卫生服务需求不相适应。为进一步满足人们日益增长的医疗卫生服务需求,本人计划投资在榆阳区开办一所综合内科、中医科诊所,以更好服务附近人民群众。
新建的诊所地址榆林市榆阳区长虹北路东九排一号,占地面积90平方米,建筑面积100平方米,共3间,实用面积70平方米。该地点地处7队小区,交通便捷,周边小人口较多,周围无医疗机构,托幼机构2所,食品生产经营单位1家。
本诊所选定于此 ,一方面方便了周围群众就诊 , 进一 步满足了人们对服务的需求 , 达到了互补互利的效果。诊所内设有完整的污水、污物处理系统。
诊所地址拟定后 , 本人外聘优秀的医务人员 ,按国家有关政策法规开办 , 严格管理,尽快筹建。
特此报告 , 敬请批准。
附件:建筑设计平面图
仁爱诊所(盖章)
二_年八月二十四日
村卫生室效验换证申请书2___卫生局:
我是早年在___医学院校读书,毕业后分配的___医院工作,从事医疗行业30余年,现在我已经离岗,在家休息,但是由于我多年从医,每天还有诸多的患者到我家寻医问药,如果一时半时有点还不算什么了不起的事,但是久而久之就不成体统啦,一是违反医疗制度、二是经济上也合不上,为此向___卫生局申请办一个个体诊所,主治我的专业:内科、儿科、妇外科,主用社区的闲置的房屋,增加增加的收入,又能服务附近的百姓,一举两得。
望卫生局批复
申请人:___
20__年__月__日
村卫生室效验换证申请书3__卫生局:
近年来,衢州市城市化建设日益完善,经济发展十分迅速,随着城区不断扩大,人口日渐增多,市区医疗卫生服务方面的资源短缺现象也逐渐显现出来,尤其是在______等方面与人们的医疗卫生服务需求不相适应。为进一步满足人们日益增长的医疗卫生服务需求,本单位(人)计划投资在衢州开办一所具有专科特色的医院(门诊部、医务室、卫生所、诊所),以更好地为衢州人民服务。
新建的.医院(门诊部、医务室、卫生所、诊所)地址拟定选择在衢州市区___街(路)___号,占地面积______平方米,建筑面积___平方米,共__间,实用面积___平方米。该地点地处______,交通便捷,周边小区有___人口,周围___家医疗机构,学校__所,托幼机构__所,食品生产经营单位__家。
本医院(门诊部、医务室、卫生所、诊所)选定于此,一方面方便了周围群众就诊,另一方面也作为公立医院的补充,进一步满足了人们对______服务的需求,达到了互补互利的效果。门诊部内设有完整的污水、污物处理系统及化粪池。
医院(门诊部、医务室、卫生所、诊所)地址拟定后,本单位(人)将通过外聘及公开招聘的办法引进优秀的医务人员,采购先进设备。按国家有关政策法规开办,严格管理,尽快筹建。
特此报告,敬请批准。
附件:建筑设计平面图
___单位或个人
20__年__月__日
村卫生室效验换证申请书4______卫生局:
根据〔20__〕16号《关于城镇医药卫生体制改革的指导意见》和国务院《医疗机构管理条件》的精神,为了更好的发挥社会办医的作用,满足广大人民群众医疗保健需要,本人拟申请设置______医疗门诊。具体申请事宜如下:
一、申请设置法人为:______;家庭住址:______;申请代表人姓名:______,性别:______;年龄:______岁;身份证号码:______;手机:______;申请设置医疗机构为个体医疗机构名称为——______医疗门诊;地址:______建筑面积40㎡。门诊部为个体医疗机构,由______个人独立举办。
二、______门诊部诊疗科目设置有:内儿科、妇科专业治疗。服务对象为______市民及外来流动人口。
三、投资总额______万元。
四、附:
1、设置______医疗门诊可行性研究报告,
2、______医疗门诊门诊房屋平面图
3、申请人______身份证复印件
4、______执业医师的执业资格及执业证书复印件
5、______医疗门诊护士执业资格证书复印件
6、污水处理设计图
以上申请请贵局审查批复
申请人:___
20__年__月__日
村卫生室效验换证申请书5本人拟于__申请设置个体医疗诊所,该区域常住人口20万人,外来人口3万人,常住人口多,人流量大。现无一家规范口腔科诊所。为进一不满足设置区域内人民群众求医问诊需要,申请设置口腔科个体诊所,自筹资金总额10余万元,其中注册资金10万元;设置诊所执业地址位,占地面积100平方米,建筑面积200平方米,其中业务用房面积120平方,米,并购置了综合治疗椅2台、三次真空灭菌器一台技工打磨机一台超声波清洗机一台超声波洁牙机2台口腔电子内窥镜一台光固化机一台口腔_线牙片机安全封口包装机等诊疗仪器设备,除本人外现有从业人员2名,具备口腔执业医师专业技术资格。
本医疗机构在申请批准设立后,将自觉遵守法律法规,规章和有关诊疗技术规范;严格依法从事各项诊疗活动,服从上级卫生行政主管部分的监督管理。树立以救死扶伤,防病治病,遵守职业道德。履行医师职责,为患者服务的宗旨.以(门诊。巡诊)服务方式和每天10小时服务时间,为该区域内人民群众治疗口腔科疾病。
以上申请,请卫生行政主管部门审查批准。