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在《论语·述而》中有这样一段对话:叶公问孔子于子路,子路不对。子曰:“女奚不曰:其为人也,发愤忘食,乐以忘忧,不知老之将至云尔。”意思是说:叶公向子路打听孔子,子路没有回答。孔子说:“你为什么不这样说,他这个人,发愤用功,连吃饭都忘了,快乐得把一切忧虑都忘了,连自己快要老了都不知道,如此而已。”
我们知道,孔子的成就涉及政治、经济、文化、医学、养生学等诸多方面,这些无不得益于他发愤图强、废寝忘食、勤用脑、善思考的为学精神。大脑是人体生命的活动中枢,精髓和神明高度汇聚之处,人之视觉、听觉、嗅觉、感觉、思维记忆力等,都是由于脑的作用,这些都说明脑是人体极其重要的器官,是生命要害的所在。大脑具有用进废退的特点,所以脑健则寿长,脑衰则命短。也就是说,爱学习,勤用脑是促使大脑保持活力的灵丹妙药。
在工作、学习和生活中,我们不要害怕用脑,因为脑的潜力是惊人的,人的一生,只不过用了脑的20%,还有80%的贮备量。人脑有150亿个神经细胞,一生中也只用了百分之几,所以只要善于开发脑,就不怕脑衰老。脑用得越多,大脑内各种神经细胞之间的联系就越多,形成的条件反射也越多,脑子就更灵活。科学家经常测试,发现勤用脑的人,大脑不易疲劳,脑神经细胞保养良好,尽管年龄增长,却能避免老年性痴呆。而整天无所事事、无所用心的人,不仅智力会下降,而且大脑容易萎缩和早衰。古人主张“博学强记”,“博学”可增强记忆,“强记”又可促进“博学”,二者相辅相成,要想达到这样的目的,关键是培养浓厚的学习兴趣。老年人身体机能都在退化,大脑也是如此,如果老年人能够积极有效地参加任何一种需要用脑的娱乐活动,如阅读、猜谜、下棋、打扑克和做手工艺品等,不仅可以延缓大脑衰老,而且可以预防老年性痴呆症的发生。
但是,还要切记不要过度用脑,过度用脑会加速脑细胞的死亡。人的脑细胞以惊人的速度在消耗着,虽然脑细胞贮备量是很大的,但加速常用脑细胞的死亡,仍然是导致早衰的一个重要原因。因为人的一生中只有150亿个脑细胞,损耗一个就少了一个,因此不要过度用脑。勤用脑与不过度用脑是辩证统一的,中青年人不能过度用脑,老年人要保持适度用脑,这是脑养生的总原则。
所以,当你工作、学习之后,如果感到大脑疲惫,可以用手指梳梳头,给大脑做做按摩。这样可使头部毛细血管扩张,加速头部血液循环,营养物质可充分供给脑组织,有益于醒神爽脑,加强神经中枢的正常活动,利于智力提高和全身新陈代谢。梳头时不要用力过量,每次约梳2分钟左右,梳头时用手将整个头皮和面部按摩几下,然后再梳理一遍,这样效果更佳。
多读书可益寿
文/夏建国
古代西汉刘向说:“书犹药也,善读之可以医愚。”意思是说,书像药一样,读书、学习可以医治愚蠢。
如果从医学的角度来看,读书也是可以治病养生的。这是因为,人的健康有两方面,生理健康和心理健康,二者相辅相成,互为影响。身体健康和心理健康对人都很重要。心是内因,身是外因,身通过心而起作用,心常常反作用于身。
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 6569.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucoseinduced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
guisong zhu, jinsong he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 (mmp1) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low, medium and highdose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 in culture supernatants were measured by enzymelinked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucoseinduced type ⅰ collagen and timp1 expressions in a dosedependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium and highdose ligustrazine injection could significantly increase mmp1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp1/timp1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase1; tissue inhibitor of metalloproteinase1; in vitro
腹膜纤维化是腹膜透析治疗的主要并发症,最终导致腹膜功能衰竭,这是腹膜透析患者退出治疗的主要原因[1]。腹膜纤维化以细胞外基质(extracellular matrix, ecm)的过度沉积为特点[2]。研究表明,ecm的过度沉积是由于ecm合成与降解失衡而引起[3]。ⅰ型胶原是腹膜纤维化中主要的ecm[4],其降解过程受基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase1, mmp1)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1)调控[5]。有研究证实,高糖能上调腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells, hpmcs)ⅰ型胶原和timp1的表达,降低mmp1活性[3]。本研究通过观察川芎嗪注射液对高糖刺激下hpmcs ⅰ型胶原、mmp1和timp1表达的影响,探讨川芎嗪在防治腹膜纤维化中的作用及其机制。
1 材料和方法
1.1 试剂和主要仪器 川芎嗪注射液(江苏苏中药业集团股份有限公司,批准号为国药准字h20020630);50%葡萄糖注射液(江苏方强制药厂,批号为200710111)。磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution, pbs)、胎牛血清(fetal calf serum, fcs)、trizol和rpmi1640粉剂等(gibco公司);胰蛋白酶和琼脂糖粉等(promega公司);ⅰ型胶原、mmp1和timp1酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay, elisa)试剂盒(adl公司);二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, bca)蛋白含量检测试剂盒(南京凯基生物科技公司);ⅰ型胶原、mmp1、timp1和βactin引物,mmlv第一链cdna合成试剂盒和taq酶等(invitrogen公司);抗细胞角蛋白抗体、抗细胞波形蛋白抗体、第ⅷ因子抗体和抗白细胞cd45抗体(北京中山生物技术有限公司)。nu2500e二氧化碳培养箱(nuaire公司);全自动酶标仪(biobank公司);生物电泳图像分析系统(上海复日科技有限公司)。
1.2 实验方法
1.2.1 hpmcs的培养与鉴定 取来自南京大学医学院附属鼓楼医院普外科择期腹部手术患者(排除尿毒症、腹膜炎)捐献的大网膜组织,按文献[3]方法原代培养hpmcs,按1︰3传代,第3代细胞用于实验,每次实验均由来自3个患者的标本进行3次独立实验。倒置相差显微镜观察hpmcs呈多边形,似铺路鹅卵石样外观;免疫组化鉴定抗细胞角蛋白抗体和抗波形蛋白抗体染色阳性,抗第ⅷ因子抗体和抗白细胞cd45抗体染色阴性。
1.2.2 实验步骤和分组 hpmcs用含1%fcs的rpmi1640培养液同步培养24 h后分为5组(每组设3个样本):正常组(完全培养液)、高糖对照组(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加低、中、高剂量川芎嗪(10、20和40 mg/l)组。各组完全培养液均为含有15% fcs的rpmi1640培养液。细胞置于37 ℃、5% co2培养箱培养48 h。
1.2.3 elisa法检测细胞上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1含量 分组干预48 h后,离心收集上清液,按elisa试剂盒说明书检测ⅰ型胶原、mmp1和timp1表达水平。用0.1 mol/l naoh溶解细胞沉淀,bca蛋白检测试剂盒测定细胞沉淀中蛋白质浓度,用相应蛋白质浓度结果校正检测结果。
1.2.4 半定量rtpcr 分组处理同上。采用trizol一步法提取总rna,2 μg总rna进行逆转录合成cdna,50 μl反应体系进行pcr扩增,以βactin作内参照(引物序列及反应条件见表1)。1.5%琼脂糖凝胶电泳(110 v,15 min)进行pcr产物鉴定,电泳图像分析仪扫描分析,mrna相对含量用其pcr产物吸光值(absorance, a)与βactin a值的比值表示。引物及pcr反应条件见表1。
1.3 统计学方法 实验数据用x±s表示,采用spss 15.0软件进行统计分析,组间差异比较采用单因素方差分析,两组间均数比较采用lsdt检验。检验水准α=0.05。 表1 ⅰ型胶原、mmp1、timp1和βactin引物序列及pcr反应条件
2 结 果
2.1 上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1蛋白质水平 与正常组比较,高糖对照组上清液中ⅰ型胶原和timp1含量显著升高(p<0.01),mmp1含量显著下降(p<0.01);与高糖对照组比较,低、中和高剂量川芎嗪组上清液中的ⅰ型胶原和timp1含量显著降低(p<0.05, p<0.01),且两者均呈量效关系,中、高剂量川芎嗪组上清液mmp1含量显著增加(p<0.01)。见表2。表2 各组上清液中ⅰ型胶原、mmp1和timp1蛋白质表达
2.2 hpmcsⅰ型胶原、mmp1和timp1 mrna的表达 与正常组比较,高糖对照组hpmcs ⅰ型胶原/βactin mrna和timp1/βactin mrna分别上升(15.43±0.83)倍和(4.19±0.09)倍(p<0.01),mmp1/βactin mrna下降(86.9±0.44)%(p<0.01);与高糖对照组相比,低、中、高剂量川芎嗪组ⅰ型胶原/βactin mrna和timp1/βactin mrna表达水平均显著下调(p<0.05),两者均呈量效关系,中、高剂量川芎嗪组mmp1/βactin mrna表达显著增加(p<0.05)。见图1和图2。
3 讨 论
高糖透析液导致ecm过度沉积是腹膜纤维化的病理基础[2],研究表明,高糖不仅增加hpmcsⅰ型胶原的表达,并且引起ⅰ型胶原降解酶系mmp1/timp1的表达失衡[3]。我们的研究结果与之基本相同,此外我们发现,川芎嗪能显著对抗高糖的上述作用。
在生理条件下,hpmcs可以产生一定量的ecm和mmps/timps[3, 6]。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系,几乎能降解全部ecm成分。timps是内源性分泌蛋白,作为mmps的特异性抑制因子,其n'端可与相应的mmps催化活性中心的锌离子结合而抑制其催化活性[7]。本实验通过研究川芎嗪对hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型胶原及其降解酶系mmp1/timp1分泌及表达的影响,旨在探讨川芎嗪对hpmcs在高糖环境下ⅰ型胶原的合成和降解的干预作用及其机制。结果显示,川芎嗪能显著降低高糖所致的ⅰ型胶原的过度合成,同时显著下调timp1的表达,增加mmp1的表达,提示川芎嗪亦能通过调节mmp1/timp1的平衡,从而促进ⅰ型胶原的降解,减少ecm沉积。由此我们推测,川芎嗪可能具有预防或延缓腹膜纤维化的作用。
川芎嗪是中药川芎的有效成分之一,属酰胺类生物碱,具有活血化瘀的功效。药理实验证明,川芎嗪具有扩张血管、改善微循环、调节免疫和钙离子拮抗的作用[8]。目前川芎嗪抑制ⅰ型胶原、timp1和增加mmp1表达的机制尚不清楚。以往的研究发现这可能与抑制转化细胞生长因子β1(transforming growth factorβ1, tgfβ1)表达有关[9, 10]。tgfβ1是重要的致纤维化细胞因子,参与了腹膜纤维化的病理过程[2]。tgfβ1可增加ⅰ型胶原的合成,并且抑制mmps的活性而激活timps,使ⅰ型胶原降解减少[3, 11]。有研究报道,川芎嗪能降低多种细胞如心肌细胞、肝细胞和血管内皮细胞的胶原合成和timp1表达,而增加mmp1的分泌和表达,进一步的研究发现这可能是通过抑制tgfβ/smads信号传导通路继而抑制tgfβ1表达的结果[9, 10, 12]。我们前期研究证实,川芎嗪能下调高糖致hpmcs tgfβ1的表达(文章待发表)。因此我们推测,川芎嗪抑制tgfβ1的表达可能是其抑制hpmcs ⅰ型胶原合成和调整mmp1/timp1表达平衡的机制之一,其具体机制将是我们下一步要研究的内容。
综上所述,川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型胶原的过度合成,并且通过调节mmp1/timp1的平衡,促进ⅰ型胶原降解,从而减少ecm的沉积,防止腹膜纤维化的发生和发展。因此,川芎嗪可能具有预防或延缓腹膜纤维化的作用,这对腹膜纤维化的机制及其防治的研究有一定借鉴和应用价值。
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第六条担保人提供担保的期限为自员工(被担保人)报到入职之日起至员工(被担保人)与公司解除劳动关系之后六个月内,因特殊情况需要延长担保期限的,担保期限另行约定。
第七条担保人担保额不低于该员工月工资总额的3倍。
二.总则
第一条为加强公司的内部管理,保证员工遵守公司各项规章制度以及法律法规,防范因特殊岗位员工的失职或违规给公司带来的风险,维护公司权益,特制定本制度。
第二条公司物流管理部和财务部员工,无论何种用工形式,在接到聘用通知后应马上着手办理《担保书》(见附件)一式三份(公司、担保人、被担保人各执一份),并在报到之前交公司核实后方给予办理入职手续。
第三条公司从事销售工作的员工无论何种用工形式,从试用期开始,必须交纳不少于3万元的风险保证金。
第四条人力资源部全面负责公司员工担保的管理工作。
三.担保资格
第八条担保人可以是员工(被担保人)的朋友、近亲属,也可是本公司在职员工(但不可互相担保),同时必须符合以下条件:
1.担保人必须是完全民事行为能力人。
2.具备郑州市户籍,并且是电力系统员工。
3.在郑州市有住所并有正当职业及固定经济收入来源(由担保人工作单位提供加盖其单位公章的收入证明)。
四.担保核对和变更
第九条到公司应聘特殊岗位员工在报到入职前须将其担保人的详细资料,提交至人力资源部审核。由人力资源部负责与担保人签署担保书,担保人还须提供身份证原件供核验及复印存档。
第十条公司人力资源部对特殊岗位员工每年核对担保一次,必要时每半年核对担保一次或随时核对担保。核对方式包括:电话问询、家访等。
第十一条担保人工作单位、住址、电话或相关信息有变更时,员工应马上通知人力资源部更新担保人资料。
第十二条如担保人因故丧失担保资格,员工应立即自动按规定另行更换担保。
第十三条发生以上第十一条、第十二条情况而员工不予呈报事后被察知者,视情节轻重予以处罚。
第十四条员工因故须更换担保人者,应告知理由并另择担保人,重新办理担保手续,核准后发还原担保书。
购车方(以下简称乙方):
甲方双方本着自愿的原则,经协商同意签订本协议,以资双方共同遵守执行。
第一条甲方根据乙方的要求,同意将__________汽车壹辆;发动机号______;车架号______,计价人民币__拾__万__千__百__拾__元(¥____),销售给乙方。
第二条因资金短缺原因,乙方需向银行申请汽车消费信贷专项资金贷款,并请求甲方为其贷款的担保人。
第三条乙方在签订此合同时,首先在银行开立个人存款账户、申办信用卡,并安不低于所购车辆总价的__%的款项,计入民币____万元存入该账户。剩余款项____元向银行申请贷款,并按期向该银行归还贷款本息。
第四条作为乙方贷款担保人,甲方接受银行委托,对乙方进行贷款购车的资信审查,乙方必须按甲方要求提供详实证明资料配合甲方工作,并在贷款未偿清之前,必须在甲方指定的保险公司办妥所购车辆信用或保证保险以及贷款银行为第一受益人的车辆损失险、第三者责任险、车辆资抢险、不计免赔险及其相关的附加险。在此前提下,乙方按甲方指定场所对所购车辆进行交接验收,并签署《车辆验收交接单》。
第五条乙方在未付清车款及相关款项前,同意将所购车辆作为欠款的抵押担保物,此抵押物在乙方发生意外且无力偿还时,按最长不超过三折旧比例作价给甲方。并将购车发票、合各证及车辆购置附加费凭证交甲方保存,期间不得将所购车辆转让、变卖、出租、重复抵押或做出其他损害甲方权益的行为。
第六条在乙方提供停车泊位证明及其他入户所需证明条件下,甲方可协助乙方办理车辆的牌、证、保险手续,实际费用由乙方承担。
第七条在三保期限内,乙方所购车辆如出现质量问题,自行到厂家特约维修服务中心进行交涉处理。此期间,乙方不得以此为借口停止或拖延支付每期应向银行偿还的人款。
第八条如乙方发生下列情况,按本合同第九条规定处理:
1.乙方逾期还款,乙方经甲方二次书面催讨,在第二次催讨期限截止日仍不还款的(逾期5天后,即发出书面催讨,二次催讨间隔为7天,第二次催讨期限截止日为文书发出日第7天);
2.乙方借口车辆质量问题,拒不按期偿还欠款;
3.发生乙方财产被申请执行,诉讼保全,被申请破产或其他方面原因致使乙方不能按期还款的。贷款未偿清之前,不在指定的保险公司办理本合同第四条所指各类车辆保险;
4.其他情况乙方不能按期向银行还款;
5.乙方违反本合同第五条的规定,未经甲方同意,擅自将车辆转让、变卖、抵押。
第九条乙方承诺,不论任何原因发生第八条的事由之一时:
1.甲方有权要求乙方立即偿还全部贷款及利息,并承担赔偿责任;甲方有权持合同就乙方未偿还的全部欠款,向有管辖权限的人民法院申请强制执行。乙方自愿接受人民法院的强制执行。
2.甲方有权按合同规定行使抵押权拍卖变卖乙方所购车辆,拍卖所得价款偿还全部债款和其他欠款。如果出售所得的价值(扣作必要费用外)不足偿还全部欠款和费用总和的,甲方有权向乙方继续追偿,如果出售所得超过欠款和费用总和的,甲方应将超过部分的钱款返还给乙方。
3.甲方有权要求乙方除支付逾期款额的利息外,并按逾期总额的5‰/日计付滞纳金。
第十条在分期还款过程中,乙方所购车辆发生机动车辆保险责任范围内的灾害事故,致使车辆报废、灭失,保险公司赔款应保证首先偿还尚欠银行的贷款及利息部分。
第十一条除车款外,乙方尚须向甲方交纳担保费,金额以借款额为基数,随贷款年限一次付(一年1%;二年2%;三年3%)。乙方如提前还清车款,从还清日起,甲方自动终止担保人义务。
第十二条乙方配偶或直系亲属,作为共同购车人,须就此合同内容签署同意书,作为本合同附件。
第十三条乙方担保人自愿为乙方分期付款购置汽车担保,须就此合同的内容签署担保书,作为本合同附件。
第十四条本合同按合同条款履行完毕时,合同即自行终止。
第十五条本合同需经公证处公证后生效。
第十六条本合同一式五份,甲、乙双方及贷款银行、保险公司、公让处各执一份。
附件1:同意书
附件2:担保书
供车方:×企业购车方:
法定代表人:法定代表人:
附件1:
同意书
致:×企业
鉴于____(购车人)与贵单位于___年__月__日签订的《购车合同书》购买壹辆______型号汽车一事,本人做为______(购车人)的配偶(直系亲属),对春关系存续期间财产享有共同所有权,对债务亦共同承担义务。为此,特向贵单位确认如下:
一、本人同意_____(购车人)将所购汽车低押给贵单位,作为仙款购车所欠款的抵押担保物。
二、本人愿同购车人共同参与对银行欠款的偿环,直到对银行的欠款本息全中偿还完毕。
三、(若共同购车人与购车人系夫妻关系)倘若购车人与本人解除夫妻关系,除非法院离婚判决书或调解书或经民政部门办理的离婚协议书中专门注明该车辆所有权和债务的归属为购车人,否则不解除本人还款义务。
四、本人已详细阅读过了《购车合同书》,充分理解合同经过公证后上有强制执行效力。我同意放弃权和抗辩权。
五、本同意书一经本人签字或盖章后即对本人具有法律约束力。
同意人(即购车人配偶)__________(签字盖章)
身份证号:__________________
签署时间:____年__月__日
附件2:
担保书
________自愿作为汽车消费贷款购车人________的担保人,承认并遵守以下条款:
一、当购车人未按期偿付欠款时,承担连带担保责任。
二、对由于购车人未按期偿付欠款而引起的一切相关损失及经济赔偿责任,承担连带担保责任。
Abstract:Objective Regulating telomerase activation is an ideal way to treat cancer . Current studies show that wogonin has the attributes of antioxidation and inhibition on the growth of tumor cells . This study aimed at evaluating the relationship between telomerase activation and apoptosis after wogonin administration in nude mice which implanted human ovarian cancer cells SKOV3. MethodsNude mice with implanted human ovarian cancer cells SKOV3 were randomly pided into five groups, including high dose group ,low dose group , normal control group , cisplatin therapy group, and combined therapy group (cisplatin and wogonin) . The expression of hTERT, Bcl-2, Bax and the apoptosis index were detected by immunohistochemistry.Results The results showed that wogonin could significantly suppress the growth of tumor compared with controlled group. The down expression of telomerase activation and the effectiveness was related to the dose of wogonin . With the increase of suppressing on tumor ,the expression of Bcl-2 decrease regularly , and it showed the opposite tendency of the apoptosis index . While the expression of Bax increased regularly ,and it showed the same tendency with the change of apoptosis expression. ConclusionWogonis can suppress the growth of tumor and regulate telomerase activation. The effectiveness is related to the dose of wogonin , the effect of wogonin would be better if it is combined with cisplatin in the treatment of tumor . It downregulates the activation of telomerase accompanied with apoptosis of cells ,the possible reason is that it damages the structure of telomerase and switch on apoptosis gene .
Key words:Wogonin;
Tumor of the ovary;
Telomerase; Apoptosis
端粒酶是维持端粒长度、确保肿瘤细胞不退出细胞周期而得以永生化的关键之一。85% 的肿瘤细胞表达端粒酶活性,端粒酶的激活与肿瘤增殖密切相关,因此端粒酶成为治疗恶性肿瘤的一个理想的靶点。近年来寻找和研究端粒酶抑制剂是国内外研究的一个热点。本课题组前期研究汉黄芩素表明在体外它具有诱导卵巢癌细胞凋亡作用,能抑制端粒酶活性的表达[1]。本研究通过动物实验,观察汉黄芩素对肿瘤生长的抑制作用,并研究其对移植人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠组织端粒酶蛋白hTERT影响与凋亡的相关性。
1 材料
1.1 细胞人卵巢癌SKOV3细胞由广西肿瘤防治研究所提供。培养于含10%的小牛血清,100 u/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的RPMI-1640培养液中,37℃,5%CO2培养箱中孵育培养、传代。
1.2 药物汉黄芩素是从黄芩根中分离出的一种单体,分子量为284 kDa,黄色晶体,其化学性质、理化性质、光谱数据参见文献[2]。注射用顺铂(冻干型),齐鲁制药有限公司生产。
1.3 裸鼠裸鼠由上海斯莱克实验动物有限公司提供,4周龄,约20 g左右,雌性,生产许可证SCXK(沪)2004-0005。
2 方法
2.1 动物分组及给药将对数生长期的人卵巢癌细胞SKOV3经胰酶消化后,制备成107/ml的细胞悬液,每只裸鼠腋部皮下接种0.2 ml,约2周后接种原位出现肿瘤,成功率为27/30。选取其中25只裸鼠随机分为5组即:汉黄芩素高剂量A组600 mg·kg-1·d-1;低剂量B组300 mg·kg-1·d-1;常规治疗C组腹腔注射顺铂3 mg·kg-1·d-1;联合用药D组同时用腹腔注射顺铂3 mg·kg-1·d-1和灌胃给药600 mg·kg-1·d-1;空白对照E组灌生理盐水10 ml·kg-1·d-1;采用灌胃给药开始治疗,共用药10 d。停药7 d后处死所有裸鼠,取瘤块并分成约0.1 g/份,福尔马林固定,石蜡包埋。常规HE染色。
2.2 检测裸鼠组织中hTERT,Bcl-2,Bax蛋白的表达方法采用抗生素-生物素过氧化酶复合物(S-P)免疫组化法。
组织切片0.4 μm, 55℃烤片过夜,常规脱蜡,高压修复抗原,PBS洗涤3次。3%H2O2孵育,室温5~10min,H2O2要覆盖组织,PBS洗涤3次,滴加1:100的1抗,孵育1 h。PBS洗涤3次。滴加生物素标记的第2抗体,37℃,10~15min, PBS洗涤3次。DAB显色,用中性树脂封片。
对照设置:阳性对照片染色步骤同上述;阴性对照片用PBS代替一抗;其余步骤同上。
2.3 检测裸鼠组织中凋亡指数表达(TUNEL法)组织切片,常规脱蜡,20μg/ml的蛋白酶K室温下消化20 min,PBS洗5 min×3次。3%H2O2甲醇液阻断内源性过氧化物酶20 min。PBS洗5 min×3次。3%牛血清白蛋白阻断20 min, PBS洗涤,TUNEL反应液,60 min,PBS洗3次,加入转换液,37℃,30 min。PBS洗涤3次。DAB显色,3~5 min,苏木素染10~20 min,电吹风吹干,中性树脂封片。
对照设置:阳性照片为加TUNEL反应液前用DNA酶Ⅰ消化30min,阴性对照片不加TUNEL反应液中的TdT,其余步骤同上。
2.4 免疫组化判断
2.4.1 对照染色每批染色的阳性对照片应显示为阳性,阴性对照片应显示为阴性,否则整批片重染。
2.4.2 免疫组化染色阳性判断标准hTERT蛋白阳性反应位于胞浆和胞核中表达;Bcl-2,Bax蛋白阳性反应位于胞浆内表达,呈棕褐色或棕黄色。
2.4.3 免疫组化染色分级在全片上、下、左、右、中各随机选取一个400倍视野,观察每个视野中阳性细胞的染色强度及该强度细胞占视野中所有癌细胞的百分率。
分级:按阳性细胞占总细胞数的百分率分4级,I级:5%~25%;II级:26%~50%;III级:51%~75%;IV级:﹥75%。≥5%作为阳性标准,
阳性细胞的染色强度分为4级:1级:(±);2级:(+);3级:(++);4级:(+++)。各阳性对照片的染色强度定为4级作为参照。
一个视野的免疫组化染色得分[6]=该视野中的各种染色强度与该强度阳性细胞的百分率级别的乘积之和,即染色强度为1级的阳性细胞百分率级别×1+染色强度为2级的阳性细胞百分率级别×2+染色强度为3级的阳性细胞百分率级别×3+染色强度为4级的阳性细胞百分率级别×4。该组织的免疫组化染色综合得分=5个视野的免疫组化染色得分之总和÷5。
2.4.4 细胞凋亡判断及记数凋亡细胞核固缩呈圆形或椭圆形、蓝黑色,染色体沿核膜形成半月状或新月状,部分核凝固成致密小圆球形。光镜下随机选取5个以上高倍视野,每个视野不少于1000个细胞,按阳性细胞占细胞总数的百分率作为凋亡指数。
2.5 统计学分析用SPSS13.0统计软件,数据以均数±标准差表示,两样本均数的比较用t检验。多个样本均数的比较,方差齐用q检验法,方差不齐用秩和检验;率的比较用确切概率法;相互依存关系的检验用方差分析F检验。
3 结果
3.1 肿瘤组织病理学观察各组裸鼠解剖时均未见胸水、腹水;联合组瘤体最小,易剥离,血供较差,切面灰白,并有液化坏死区域。显微镜下见对照组癌细胞生长旺盛,形成癌巢,细胞形态不规则,大小不等,核大呈圆形或卵圆形,核膜增厚,核分裂相较多。药物作用后联合用药D组癌细胞呈大片坏死,结构不清,大部分癌细胞崩解,偶见残余的癌细胞,间质纤维化,角质物质增多癌组织发生退行性变化,高剂量A组、低剂量B组及常规治疗C组癌细胞变性坏死,偶见核分裂相,部分癌细胞核固缩,肿瘤退行性变较对照E组明显。各组HE染色见图1。
3.2 裸鼠肿瘤组织hTERT蛋白表达hTERT蛋白阳性表达大部分在胞浆,少部分在胞核,(见图2)。染色综合得分比较(见表1)。各用药组与对照组比较,有统计学差异(P
3.3 裸鼠肿瘤组织Bcl-2蛋白表达Bcl-2蛋白阳性表达在胞浆,(见图3)。染色综合得分比较(见表2)。各用药组与对照组比较,有统计学差异(P
3.4 裸鼠肿瘤组织Bax蛋白表达Bax蛋白阳性表达在胞浆,(见图4)。染色综合得分比较(见表3)。各用药组综合得分高于对照组,有统计学差异(P
3.5 裸鼠肿瘤组织凋亡指数的变化表达凋亡细胞核固缩呈圆形或椭圆形、蓝黑色,染色体沿核膜形成半月状或新月状。部分核凝固成致密小圆球形,(见图5)。凋亡指数的变化(见表4),其直方图,(见图6)。各用药组与对照组比较,有统计学差异(P
凋亡指数:联合用药D组>高剂量A组>顺铂常规化疗C组>低剂量B组>对照E组。
3.6 裸鼠组织不同组hTERT,BCl-2及Bax染色综合得分比较根据表1~3,将测定各蛋白表达的结果汇总,获得直方图。见图7。表4 裸鼠肿瘤组织凋亡指数表达(略)
从图7结果可知,hTERT与Bcl-2表达: 联合用药D组对照E组。
4 结论
细胞凋亡(apoptosis)是细胞在一定生理或病理条件下,遵循自身的程序,自我结束生命的过程。它是一个主动的、高度有序的、多基因控制的、一系列酶参与的过程,BCl-2,Bax是与凋亡最相关的调控基因。
Bcl-2最初是从人的滤泡性B细胞淋巴瘤中分离出来的,它定位于人第18号染色体,在淋巴瘤中极易发生染色体易位t(14;18),使Bcl-2与14号染色体上IgH基因并列导致过度表达,是至今为止研究最深入、最广泛的凋亡调控基因之一。Bcl-2基因表达产物是一种细胞内膜蛋白,主要位于线粒体内膜、内质网和核膜[3]。通过抵抗多种形式的细胞死亡,延长细胞寿命,使细胞数目累积增多而促进肿瘤的形成。本实验结果显示,裸鼠肿瘤组织空白对照组Bcl-2染色综合得分最高,随着汉黄芩素和顺铂作用后抑瘤率的增强,Bcl-2染色综合得分下降,表明Bcl-2与肿瘤形成有关。Bcl-2的抗凋亡机制有以下几种可能:①Bcl-2具有膜转运功能,能抑制细胞内质网Ca2+的释放,而细胞凋亡中DNA消化需要Ca2+依赖性核酸内切酶参与,推测Bcl-2可通过改变细胞器的Ca2+来抑制凋亡[4]。②Bcl-2能够抑制线粒体膜通透性转运孔开放和维持线粒体跨膜电位,进而阻止线粒体内细胞色素C和凋亡诱导因子的释放,从而抑制凋亡[5];③Bcl-2通过其BH4结构与Ced-4/Apaf-1结合,扣押Apaf-1/capase-9复合物或抑制其形成,进而抑制凋亡[6]。本实验发现裸鼠组织经药物作用后,随着药物抑制肿瘤作用的提高,Bcl-2蛋白表达逐渐下调,与凋亡指数变化的表达呈相反变化趋势,可能与汉黄芩素抑制Bcl-2基因表达有关。
Bax是1993年克隆成功的一种基因,其翻译产物与Bcl-2蛋白大约有21%的氨基酸序列同源,也被称为Bcl-2家族成员之一,其作用与Bcl-2相反,能促进细胞凋亡[7]。Bax蛋白广泛分布于人体许多细胞和组织中,而在多数肿瘤组织及细胞系中表达下降[8],在肿瘤形成过程,Bax大量激活或表达,通过促进细胞凋亡,抑制肿瘤形成。有研究发现转染Bax基因不仅可使多种细胞发生凋亡,而且可使放射线和化疗药物等许多因素诱导细胞凋亡[9]。本实验发现,随着药物抑制肿瘤作用的增强,Bax蛋白染色综合得分增加了,裸鼠组织Bax蛋白表达与凋亡指数变化的表达呈同向变化趋势,可能与汉黄芩素促进Bax基因表达,从而诱导了细胞凋亡有关。
肿瘤的发生,一方面源于肿瘤细胞过度增殖,另一方面与细胞凋亡相对不足有关。端粒酶与凋亡的关系引起了人们极大的兴趣[10]。Fu等[11]通过对嗜铬细胞瘤细胞PC12中的观察发现端粒酶活性随Bcl-2表达增强而升高,Bcl-2的抑制剂可使端粒酶活性迅速下降。张百红[12]等研究证明苦参碱能显著抑制SGC-7901胃癌细胞的Bcl-2的表达;凋亡抑制基因Bcl-2能够调节端粒酶的活性,当Bcl-2过量表达时,端粒酶活性增强;当Bcl-2表达量下降后,端粒酶活性也下降。Mahitosh等[13]研究表明,抗凋亡基因Bcl-2过度表达和凋亡基因Bax表达下降可导致端粒酶活性显著增加。本实验也发现,经汉黄芩素作用后随着浓度增加,抑瘤率的提高,凋亡现象逐渐明显,端粒酶hTERT蛋白、Bax蛋白表达逐渐下调,而Bcl-2蛋白表达逐渐增强。端粒酶活性、hTERT蛋白的下调伴随Bax蛋白表达的增强、Bcl-2蛋白表达的减弱,说明端粒酶与凋亡密切相关。无限增殖是肿瘤细胞的生物学特征,增殖失控关键在于端粒酶的激活;同样凋亡调控功能失调也与肿瘤的形成有关,可以推测凋亡相关基因Bcl-2,Bax直接或间接参与端粒酶活性的调控。下调端粒酶活性,同时也伴随细胞的凋亡,可能是药物对端粒活性的抑制和对端粒结构的破坏,启动了凋亡基因。然而端粒酶的活性调节是一个复杂的系统,汉黄芩素如何抑制端粒酶活性、怎样调节凋亡相关基因如Bcl-2,Bax而发挥作用机制仍不明确,需要我们进一步通过信号传导通路来证实。
参考文献
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[3]Zamzami N,Brenner C,Marzo I,et al.Subcellular and submitochondrial mode of action of Bcl-2-like oncoproteinss[J].Oncogene,1998,16(17):2265.
[4]Lam M,Dubyak G,Chen,et al.Evidence that Bcl-2 represses apoptosis by regulting endoplasmic reticulum-associated Ca2+ fluexes[J].Proc Natl Acad Sci USA,1994,91(14):6569.
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[9]Arafat WO,Gomez-Navarro J,et al.An adenovirus encoding proapoptotic Bax induces apoptosis and enchances the radiation effected in human ovarian cancer[J].Mol Ther,2000,1(6):545.
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[11]Fu Wm,Begley JG,Michael W,et a1.Anti-apoptotic role of telomerase in pheochromocytoma cells[J]. Biol Chem,1999,274(1l):7264.
探亲旅游签证
(一)、申请赴德国探亲签证的手续
德国移民法规定具备下列条件之一者,可以申请前往德国探亲:
(1)德国公民的配偶;
(2)德国公民的父母(包括养父母)、子女(包括养子女);
(3)德国公民的兄弟姐妹(包括同父异母或异父同母的兄弟姐妹);
(4)其他适合德国法律规定可以探亲的外国公民。
中国公民前往德国探亲或旅游,可持下列的证明材料前往德国驻华使领馆申办签证:
(1)在德国的亲属朋友的邀请信件;
(2)在德国的亲属朋友出具的、经过当地外国人管理局或律师所公证的经济担保书;
(3)申请人所在地公证机关出具的亲属关系证明;
(4)申请者身体健康证明(入境居留超过3个月的需此证,居留不超过3个月的则不需此证);
(5)有效的中国护照;
(6)填写签证申请表(居留不超过3个月的填2份,超过3个月的填3份),申请表上须贴照片。
上述证明材料,申请人可以委托中国旅行社代办转交大使馆,也可以用邮寄方式递交德国驻华大使馆或上海领事馆。
(二)、申请旅游签证的手续
申请有效期不超过3个月的德国旅游签证,须递交以下材料并符合下列条件:
(1)认真填写并贴上照片的黄色申请表,一式2份;
(2)有效护照;
(3)德国的某一旅行社的预订证明,证明中须写明旅游日程安排、往返和当地交通及住宿情况,团体旅游者须有个人的预定证明(旅馆、旅行情况);
(4)交付旅行费用证明;
(5)医疗保险证明(保险公司证明)每人一份;
(6)用德文或英文书写的工作单位提供的证明:工作岗位,月工资,准假证明。
(三)、探亲旅游入境居留的规定
德国对外国人入境和居留还规定:
(1)外国人前往德国探亲,获得入境签证后,还应申领居留许可证。可先委托在德国的亲属朋友事先向外国人管理局申请代办,也可在入境后再申办。
(2)入境后如果变更居留地点,要及时向外国人管理局报告。
2、证明遗赠抚养协议,收费10~50元; 3、证明印鉴属实,证明副本、节本、译本与原本相符、证明影印件与原件相符,收费5元; 4、证明遗嘱、遗赠、证明产权、证明查无档案记载,收费10元;
5、证明法人资格、收养、财产分割、证明产品抽样检测,收费10~30元;
6、证明担保书、证明公司章程、资信情况等有关文书,收费50~200元;
7、证明商标注册,收费50元;
8、证明劳动保险金、养老金、子女助学金的,每件收费5元;
9、证明招标、拍卖、开奖、收费100~150元;
10、证明劳务合同,收费5元;
11、起草、修改合同文本,收费5~20元;
12、证明股票、房屋转让、买卖、土地使用权有偿转让的,按股票面额或房价的千分之三收费,但最低收费不得低于10元;
13、证明财产继承、赠与:
接受益人收金额总数收费
(1)不满1万元的,按1%收费,但最低收费10元;
(2)1万元以上的,按2%收费。
14、证明债权文书有强制执行效力的,按债务总金额的千分之三收费,原债权文书经过公证的,按千分之一收费,最低收费10元。
15、翻译,每千字15元,不足千字的按千字计。
外文打字,每千字2元。
外文校对,每千字5元。
16、保管遗嘱或其他文件、证据保全,收费5~10元。
17、已受理的立卷中途撤回的,收费2~5元;
18、证明经济合同、企业承包、经营合同:
(1)标的总额不满10万元的,收费10~50元;
(2)10万元以上不满50万元的,收费100元;
(3)50万元以上不满100万元的,收费300元;
(4)100万元以上不满200万元的,收费600元;
(5)200万元以上不满300万元的,收费1000元;
(6)300万元以上不满400万元的,收费2000元;
日本的签证分为长期签证和短期签证两种:居留期限在1年以下的为短期签证,1年以上(最长为3年)的为长期签证。长期签证主要包括留学签证、学术交流签证、教育传授签证、普通工作签证、高级劳务签证。还有若干种类特殊签证,如日本孤儿、日本人的中国配偶等,以及因公务的外交、新闻、贸易签证等。
按照日本入境管理法的规定,外国人有一定的专业特长的,日本允许他们在日本居留一定的时间,从事一定的工作。通常能够获得在日本长期居留的几种签证有:技术签证、工作签证、被抚养者签证、特殊签证等。
1.技术签证
包括代号为4-1-7和4-1-12两种签证。外国人中的专家教授、讲师、医生、翻译和各种技术人员,如果被日本有关企业或科研机构、学校雇佣,可以获此签证。入境后,一般允许居留1年,以后再凭雇佣证明申请延期到3年。这些入境者的配偶和未成年子女,也可以同时入境居留。
2.工作签证
签证的代号为4-1-13,是发给各种熟练工人的入境签证。例如,接受雇佣的中国厨师,受日本人或华侨开设饭馆的雇佣,可以以此种身份入境。这种入境签证有效期为1年,对有特殊技能的劳工,1年期满后,可以申请2次延期,居留3年时间,3年居留满后,必须出境。而后,他们在国外再重新申请入境,可继续居留3年。只要有雇主雇佣,每隔3年就可以重新入境1次,不受入境次数的限制。
3.被抚养者签证
通常是指在日本华侨的父母、配偶或未成年子女,可以申请此种签证。签证期限一般为签证期满后,可要求延期居留,以后可以得到3年有效的居留签证,都可长期居留下去,这类签证实质上就是移民签证。
4.特殊签证
这种签证主要是发给具有日本血统或与日本有血缘关系的人,有效期为3年,可以申请延期,直至取得永久居留权利。按照日本有关法律规定。连续在日本居留10年以上,就能获得永久居留权,如日本血统人、日本公民的外国籍配偶、对日本有显著贡献者,这类签证实际上是移民签证。
日本签证的有效期限,除外交及公务护照外,原则上过境和观光签证为4个月;其他签证为6个月。有效入境次数,原则上仅限一次,再度入境时必须重新进行签证。例外者,如果确认属于必要,也给予2次或数次有效签证。
申请途径
根据日本法律的规定,不同种类的签证,应按照不同的方式进行申请。技术签证与工作签证,应当由聘请或雇佣部门向当地的入国管理局提出申请,即申请入境许可。申请时必须提供聘请书、合同书、担保书等证明材料。入国管理局呈报法务省核准后,便发给一份有签证代号的《号留资格证明书》向日本驻华大使馆或领事馆申请签证。
被抚养者签证和特殊签证,一般由申请人直接向日本驻华大使馆或领事馆申请即可。申请时出具亲属关系证明,担保证明或工作采用证明。在日本出生的,出具户籍誉本就可以,而不再出具其他证明。从申请到取得入境签证,一般需要3个月至半年左右。
申请日本签证通常可有两种方式:一种是由申请人在国外向日本使领事馆提出申请。一种是由旅居日本的亲友向所在地的入国管理局提出申请。无论采取哪一种方法,最后都是经过法务省批准后,授权大使馆或领事馆签发入境签证的。
1.向日本驻外使领馆申请的程序
无论是做工,还是定居等,均可以由申请人直接向日本驻在当地的领事馆申请签证。填写签证申请表格,递交与申请事由相应的证明材料。然后,由日本大使馆或领事馆将有关档案材料报回日本外务省,外务省转送法务省,再由法务省会同有关部门共同审核。申请高级劳务签证的,则需送到通产省核准。如无不同意见,再由外务省批示驻大使馆或领事馆签发签证。从申请到取得签证,一般需要3个月左右时间。
2.在日本国内向入境管理局申请的程序
加拿大是一个由世界各地移民组成,靠移民发展壮大的国家,但加拿大不把自己定位为多民族国家。而是定位为多元文化国家,表示对来自世界各地的移民兼收并蓄,一律平等。移民也一直成为加拿大人口增长和经济发展的基本条件。每年成功申请加拿大身份的中国人都在3万人以上。加拿大政府2009年的永久居民移民目标是24万~26.5万人。
最适合人类居住的地方
自然环境美丽,这是大多数新移民对加拿大的第一印象。加拿大位列7大工业国之一,经济高度发达,环境同样无与伦比,雪山碧海、湖光山色散发着无穷魅力。地广人稀,许多地方还处于未受明显干扰的原始状态。另外,加拿大人的环境保护意识十分强烈,许多人都在致力于环境保护工作,政府的环保法令也非常严格。加拿大人为此非常自豪,颇有点“谁不说俺家乡好”的味道。
加拿大人的富裕程度和生活质量在全世界名列第一。在联合国计划开展署公布的人类发展世界报告申,每年采用自然地理、资源气候、环境质量和人民生活居住条件、医疗卫生水平、社会福利保障、人均寿命、教育水平、实际人均收入等多项要素综合评价,加拿大已连续7年蝉联“最适合人类居住的地方”这一美誉。
一人成功全家移民
主申请人条件合格而获准移民,则配偶及未成年子女将自动获得移民资格。加拿大在世界先进国家中被列为“社会主义化的资本主义国家”,有令人羡慕的社会福利政策,最主要的有:终身免费医疗,完全免费的12年义务教育,优厚的社会福利金、老年养老金,儿童牛奶金等。
加拿大鼓励各族裔保留发扬自己的文化,这和同是移民国家的“民族大熔炉”――美国形成鲜明对比。另外,与美国的紧缩移民政策不同,加拿大热情欢迎海外各地的移民。并且,加拿大没有种族歧视,社会治安稳定。对于难于到达美国或难于留在美国、欧洲及其他非移民国家的华人,移民加拿大后既可以自由方便地进出美国及世界各地,又可以享受比美国等国家犯罪率低、无歧视的社会环境。
加拿大护照――世界通行证
住满3年后,移民就有资格申请取得加拿大国籍。持加拿大护照可以全世界通行,自由出入100多个国家。可以免签证人境的国家包括:美国、英国、澳大利亚、新西兰、丹麦、芬兰、挪威、瑞典、瑞士、德国、意大利、比利时、巴西、新加坡、西班牙、葡萄牙以及沙特阿拉伯等国。
同时,加拿大承认双重及多重国籍。为了吸引更多的移民,加拿大还打算修改移民法,将入籍时间放松至“移民在加拿大住满2年就有资格申请取得加拿大国籍”。即使不入加拿大籍,有加拿大永久居民签证之后,申请前往第三国的签证也容易很多。比如,现在瑞士政府对持有加拿大永久居民签证的某些第三国公民给予免签证进入瑞士的待遇,中国公民在此范围之内。
华裔商人回国投资获优惠
在取得加拿大公民身份后,华裔商人回国经商在经营和税收上将享受特别的待遇。一般表现为地方政府大力扶持,在部分行业经营上给予特殊政策优惠,减免国家与地方税收全额,放宽特定行业的经营范围等。
拓宽子女的发展空间
在加拿大,任何公民只要年满5岁,都可以选择居住区内的公立学校人读,高中毕业之前的12年教育所有费用全免。上大学只需通过高中毕业考试,可通过教育基金为孩子储存上大学的费用,即只要每年存入银行固定账户2000加元,政府就会每年贴补400加元直到孩子18岁,当然这笔钱必须完全用于孩子上大学。此外,也可靠政府提供的助学金、学校颁发的奖学金或者申请低息甚至无息的学习贷款来完成学业。
如果想在国外得到高薪的职位或较高的社会地位,没有一个被广泛承认的文凭是不行的。加拿大的文凭在全世界都得到承认。有了移民身份。在加拿大攻读学位的学费与加拿大公民相同,只相当于海外留学生的1/3~1/4,筹不到钱可以贷款。如果失业,政府还会发给补贴让其去参加培训或读书。
移民加拿大之途径
移民加拿大主要有以下途径。
投资类移民
联邦投资移民、魁北克投资移民均属此类。申请人须具有实际经营或高级行政管理经验,且拥有不少于80万加元(约合人民币496万元)的个人总资产值。所需费用如下。
投资款 按照加拿大投资移民的申请要求,在经过面谈并获得批准后,申请人需要履行一个投资义务,可通过两种方式实现:一是投资40万加元(约合人民币248万元)到政府指定的基金会,5年后由政府担保收回全部本金,但无利息收入;二是一次性支付12万加元(约合人民币75万元)作为40万加元5年的利息,此投资款不能收回,也是移民申请人的主要移民成本。
申请手续费用 主要包括申请费用(魁北克省申请费、联邦申请费和登陆费等)、文件处理费用(翻译费、公证费、财务报表的审计费和房产报告评估费等)以及由移民顾问公司收取的咨询服务费。该费用一般为十几万元人民币。
技术类移民
技术移民是最主要的,也是最可行的形式之一。技术移民属于独立移民的一种形式。简单地说,就是凭申请人的文化程度、职业技能、语言及适应能力等方面的综合实力来申请移民。一般应有大专以上学历,年龄21~49岁,英语或法语熟练,有一定工作经验且从事职业需符合加拿大紧缺职业列表。所需费用如下。
申请费 由移民局收取。主申请人550加元/人,配偶及22周岁以上随行子女550加元/人,22周岁以下随行子女150加元/人。
移民登陆费 该费用可退还。主申请人、配偶490加元,人。
间接费用 申请过程中,会产生诸如咨询费、服务费、公证费等的间接费用,约3~5万元人民币。如果自行申请,则只需公证等费用。
企业家移民
申请人须具有经商经验,拥有足够的资金,且有能力在加拿大创办企业或收购现成生意,此为有条件签证。既投资人取得移民签证后,要在3年内创办或者收购1个企业,如果不能完成则会被命令离境。
自雇类移民
申请人具有能力自我创业以及促进加拿大经济发展或提升该国文化、艺术生活,且拥有约20万加元的资产值。适合一些文化或艺术专业人士申请,且必须以记分方法评审。
依亲/家庭团聚移民
申请人由已合法居留于加境的亲属签具担保书,并取得加拿大移民部加签确认,以支持申请。包括居民或公民申请配偶、父母、子女等。只需提供收入证明有能力供养亲属,条件比较宽松。
移民要慎重
一场意外导致由F2到F1
到美国留学的人都知道,在申请留美签证时,自己的留学生签证叫F1签证,而配偶去美国陪读时申请的签证叫F2签证。所以好多陪读的人,都戏称自己是:F2。
陶静就是美国田纳西州大学机械系博士生牛磊的妻子,在牛磊来到美国田纳西州大学读博的第二年,她也就自然而然的申请F2来到美国,与老公一同在美国生活。陶静原本是国内知名大学的硕士毕业,来美国的目的就是想照料老公牛磊的起居生活,希望他能够早日完成博士课程。而牛磊呢,在学校是全额奖学金,每月1500美金,两个人生活,小康称不上,但也足能够解决二人的温饱了。但陪读的生活并不像两人想象的那样,老公专心读书,老婆操持家务,而变成了两个人一起读书,成了真正的“陪读”。
陶静来之前,牛磊为了给老婆一个惊喜,也为了日后两人生活的方便,新买了辆汽车,陶静刚刚踏上美国的土地,来到学校里,牛磊就迫不及待的想向老婆展示一下他们的新车。傍晚,天刚刚擦黑,二人就来到停车场,开动自己的新车子。不知是二人刚刚团聚兴奋的原因,还是因为牛磊刚刚买了车子,技术还不够娴熟所致,总之,在打算把车子开出停车场的时候,误把油门当刹车,一连撞了六辆车子,其中一辆情况严重,五辆不同程度的刮伤。由于车子是刚买的,还没有来得及上各种保险,这一下可把俩人吓坏了!陶静回忆当时的情况说:“我当时脑子里一片空白,一句话也说不出来了,牛磊也傻在那儿了。兴奋的感觉一下子就凝固住了。”
没有保险,六辆车子的赔偿金不是一笔小数目。陶静怎么也没有想到,陪读生活的第一天,不像别人说的那样,洗衣服做饭,成为幸福的小妇人,而在这场油门当刹车的车祸中结束了她刚踏上美国之路的兴奋。当时他们曾经想怎么样去偿还这笔赔偿金,陶静想到了回国找工作,因为以F2的身份是不允许打工的,也就是说她只能花钱不能挣钱;牛磊想到了申请个人破产,在美国的法律中是允许个人申请破产的,但是这样对今后的生活会有影响,这会记录在案,跟着自己一辈子。
俩人还在发愁怎么解决的时候,各个大学又开始了招生,许多在国内的同学都托他们打听一些学校的情况,什么住宿条件、奖学金的数额等,牛磊此时突发奇想:“不如陶静你也申请读博士吧,你条件好,全奖是没有问题的,每月1500美金,两人就是3000,一个月下来能攒不少,这样钱就可以还上了”。陶静想想,F2不能打工,没有收入来源,不如去读个书,有奖学金还能再读个学位,何乐不为?
“我没想到,F2的生活是那么短暂,为了还上赔偿金,我从F2转成了F1,本来想在美国做全职太太,没想到又开始读书了,这样到真是陪读了,陪着牛磊一起读书,连专业都是一样的。”陶静说。
原本以为陪读生活就会像保姆一样,与锅碗瓢盆为伍,谁知道陪读经历是各有各的不同。一场意外就改变了陪读身份。
妈妈陪着我的感觉真好
与夫妻陪读相比,父母陪伴孩子去国外读书是目前比较典型的现象。
现在还在新西兰读旅游硕士学位的苇苇,三年本科的学习都是由妈妈陪伴她度过的。回想起与妈妈一起在新西兰的日子,苇苇说:“有妈妈陪读的感觉真好!”
真得感谢MSN的便捷,记者很容易就得知了苇苇和她妈妈的故事。
在MSN的那一边,苇苇介绍:按照新西兰的规定,17岁以下的外籍学生可以申请家人陪读,申请的手续也很方便。因为我已经过了这个年龄,所以,实际上我妈妈来新西兰陪我,申请的是探亲签证,不过探亲签证的时间比较短,三个月。好在与一学期的时间相差不多,每个假期我回国,回来后就为我妈妈办探亲手续,就这样,基本上也算是全程陪读了。
你别以为我特别娇气,都挺大的了还离不开家人的照顾。主要是我从小就是个“病秧子”,常年都是“药拌饭”,练就了特强的吃药本领,不管什么药,拿起来就往嘴里放,一点都不觉得苦。可能是因为这个原因吧,家里人习惯了对我的呵护,到国外他们特别不放心,再加上我一到新西兰就大病一场,所以我妈妈就只好来陪着我了。
开销的确是一个要考虑的问题,我妈妈那时候在这里是给外国人作脸,也就是美容,所以她的开销可以自己应付。因为我爸爸是摄影师,在上海开了个影楼,婚纱摄影需要化妆,妈妈就开始弄美容了。不过妈妈是探亲签证不能打工,只能打黑工,这样的话,就要看她是否觉得值得,因为,在这里打工都很辛苦,有没有必要让父母到这里来受苦呢?我妈妈来是因为我的身体不好,没办法。
其实我也很希望她能来,她来了,我什么都不用干,可以专心学习,没有寂寞感,还是很开心的。
到后来,她自己作美容,再后来我开始跟一些公司签约工作了。由于工作了钱也不是很紧,所以我们常出去旅游,如果光我一个人是不会去的,因为那时候我妈妈在,我们就常出去玩儿。
如果经济实力条件许可,去陪读帮帮孩子的生活,也有助于他们的学习和工作,让他们发展得更好。
陪读陪读,也陪也读
美国,是很多人向往的,在美国陪读的人会有怎样的体会呢?本刊特约记者宗兴在美国采访了一位陪读的杨女士。
杨女士介绍说:我是跟着我先生来到美国的。我俩原来在国内一所著名高校是同学,先生是研究生,我读本科。我原来没有想过要出国,但是到美国读书一直是先生的心愿。他是学工程的,说希望到美国学些比较前沿的东西。所以他一上研究生就开始准备“寄托”,一阵忙碌之后,2003年8月他如愿来到了美国南部的一所大学求学。
出国之前,我和先生讨论到了我们的将来,他说我们结婚吧,这样你可以出来伴读。我和家里人去商量,爸爸同意了,但是我妈有点舍不得,她觉得我在国内找份好工作就可以了,没有必要到一个陌生的国家去。7月份的时候我和先生把证领了。
2004年1月我来到了美国。当时刚过来的时候心情特别激动,人家说“小别胜新婚”,更别提先生在国外了。
说实话,刚来美国挺失望的。觉得小城市的那些建筑比起北京上海来差远了。刚来一个月,先生说不要太累,好好适应一下美国生活,我说好啊,当时每天在家看看电视。我觉得这些年国内英语教学进步挺大的,我在国内经常看原版影碟,所以在电视上看到这些情景喜剧的时候,不算特别吃力。
先生和我商量,说我们可以先要一个孩子。我现在清闲,可以带孩子。我同意了,很快就怀孕了。怀孕期间我每天还要自己做饭,因为先生在实验室工作特别辛苦。他一般早上9点去实验室,晚上5点多回来吃个饭,然后就又去实验室了,都要到11点才能回来。有的时候,我会和他一起去实验室,有的时候就呆在家里看看电视。当时心里挺不高兴的,觉得一点也享受不到怀孕的特权(笑)。后来在差不多怀孕8个月的时候,我妈妈就来美国探亲了。她每天做饭,我就乐得清闲了。
2005年春天,孩子出生了,是个大胖小子,大家都很高兴。先生打趣地说:好不容易作了一回美国人他爹。小生命的到来给我们带来了无穷的欢乐,但是也很辛苦。晚上孩子一哭,我就要爬起来。刚开始先生也被折磨得特别累,因为他白天还要做研究,我很心疼,就劝他夜里不要起来。当然要不是我妈妈在帮助,真是不知道怎么办才好。
孩子一天天长大,我就有点在家呆不住了。我觉得这样不行,因为总是不读书人就要废掉了,于是,我萌发了申请学校的念头。但是实在不想读博士了,那样五六年投入时间太长,我打算读个短平快好找工作的专业。一次在中国学生会举办的聚会上,我听别人说读会计学挺好找工作的,于是就和先生商量。他刚开始有点犹豫,因为读这个专业没有奖学金,后来再仔细想想,也就同意了。年轻的时候还是要读书啊。
明确了这个目标了之后,我就开始准备GRE和托福了,在这里没有新东方那样的氛围。书本丢了好几年重新捡起来还是有些难度的。我上个月考完了托福,感觉还不错,现在正在准备GRE。虽然生活有些艰辛,我每天早晨起来还是挺开心的,觉得有目标,有追求。
如果你要问我后不后悔出国陪读这个选择,我觉得并不后悔。因为以前经历都挺顺的,我想出来体会一点艰辛也没有什么不好。爸爸一直鼓励我年轻的时候吃点苦没有什么不好,而且先生读博士那么辛苦,我这点累也不算什么。我想人还是要向前看,很多东西现在可能看不清,等将来回过头来看,应该是挺值得。
奉劝一些准备到美国来陪读的女孩子,如果你吃不了苦,要三思而后行。如果有机会,多学些本事也不错。
先生回国,我却留在了日本
在山东大学做教师的安小姐怎么也没想到要陪先生去日本。并且比先生呆的时间还要长。
安小姐的丈夫在中国社会科学院读博士时,参加了中日联合培训的一个项目,并被学校派去日本研修,这个项目带有26万日元的奖学金,本来以学生身份是不能带家属的,但丈夫在去日本之前把邀请函、护照等材料全部复印了一份,尝试着向日本使馆申请了“留学滞在”身份,就是家属的陪读,没想到很快就批下来了。
丈夫走后,安小姐开始边办签证边学日语,由于各种手续比较完善,签证办起来也比较顺利,没遇到什么波折。就这样,丈夫去日本半年后,安小姐也到了日本。
到日本后,由于丈夫的奖学金足够两个人在日本的生活费用了,安小姐没有像其他陪读者一样去打工,而是在家照顾着丈夫的生活。但是,由于语言障碍,在买菜、购物中她根本听不懂别人在说什么,学会和别人交流是她到日本首要面临的问题。当时,她们居住的公寓小区内有很多留学生,也有很多像她一样的陪读者,为帮助大家沟通,社区就成立了帮外国人学日语的小组,小组成员全部是社区内的志愿者或者日本的家庭主妇,她也加入这个日语学习小组一对一的开始接受日本的家庭语言帮教。每到一个家庭拜访后她都用纸记下所有的对话回家学习。当时,日本东京大学也为留学生的家属开设了免费学日语的训练班,她又抓住这个机会去上课。
丈夫一年学习期满要回国了。但是安小姐却面临一个归属的问题:如果随丈夫回国自己还要回到山东大学继续做老师,如果丈夫博士毕业了可以随他留在北京,但当时离他毕业还有一段时间;不回国的话没了丈夫的生活费自己就要去打工赚钱,而且不能是陪读身份了。想来想去,还是想留在日本,等到丈夫毕业再回国。
就这样,丈夫给她留下了到日本后积攒下来的生活费回国了。因为自己在国内大学教师的身份,安小姐作为自费研究员的身份留在了丈夫就读的学校,学校只收取很少的费用。但这剩下的钱还是不够支撑她一年的生活,恰巧,她学日语的学校贴出了一则招工信息,她马上去那家餐厅应聘。后来每天的安排就是,上午去自己的研究室搞研究,下午去日语学校学日语,晚上就去一家日本人开的中国料理店打工赚生活费。
紧张的生活锻炼了她很强的耐力,日语水平也得到了提高,她在日本还尝试着参加日语的水平考试,居然差四分就达到了最高级!已经回国的丈夫也被她的成绩吓了一跳:这个小女人自己过得蛮不错嘛。
随着丈夫博士毕业,她的“陪读”生涯也结束了。
生活有时候很有戏剧性,不知会得到什么失去什么。抓紧机会充实自己是陪读之后的最佳选择。
留学热门国家陪读政策
美国:不需经济担保
到美国去陪读就要准备好需要的材料,一般情况下包括本人护照、配偶护照复印件、配偶在美居住证明、结婚证和配偶邀请函等材料。到美国陪读不需要经济担保证明,但会检查共同生活的费用够不够。美国的陪读生活比较惬意,陪读可以选个专业上学,也可以打工。
新西兰:可以申请探亲
新西兰没有陪读签证,按照新西兰移民局的规定,新西兰留学生的配偶(含17岁以下子女)可以申请到新西兰探亲。如果留学生课程在一年之内的,其配偶只能作为一般旅行者申请;如果留学时间超过一年,其配偶赴新西兰需取得访问签证,申请这种签证需提供经济担保书、体检报告、两人的保证书、结婚证书以及留学生支持其配偶赴新西兰所写的信件等。
日本:只有夫妻陪读
在日本只有夫妻陪读,而且陪读时在日本可以工作,但如果要上学则需要重新申请学习签证。
马来西亚:要有存款证明
马来西亚原先不存在陪读。近些年,随着国内很多家长把马来西亚视为去欧美留学的“跳板”,马来西亚政府采取多项措施鼓励外国学生到马来西亚留学,包括允许留马学生的父母到马来西亚陪读。而之前马来西亚政府规定的25岁以上的中国女性不获批入境签证现在也已被取消。也就是说只要有银行存款证明,也可以通过夫妻关系陪读。
英国:须有足够资金
想到英国去陪读关键是必须有足够两个人生活的钱,如果资金没问题,可以办携行,甚至可以两人一起签出去。
如果配偶中的一方已到英国,有些东西就不得不留心准备了,首先你要让已经在英国的一方准备银行账单、邀请函、在英国的住宿证明、电话账单、签证复印件。然后自己在国内也要准备结婚证、单位准假证明。如果在英国的一方的银行账单的收入不足以支付两人的生活费,还要出示存单。英国的陪读签证相对欧洲大陆国家来说很好签,只要钱的方面没有问题,一般都不会被拒签。
澳洲:要求比较宽松
也不能失去信用!”
2001年12月中旬,56岁的胡丙申在山西省夏县乡镇企业局长的位置上内退了,老伴王金梅颇为高兴,丈夫退休前忙得和家人在一起的时间都很少,现在终于可以和她在家里颐养天年了。
可让王金梅没想到的是,丈夫退休的第二天,自家小院里便涌来许多人,这些人既有承包工程的包工头,也有个体摊贩,更有从乡下赶来的农民,每个人都口口声声要老胡还他们的欠款。堂堂局长,竟然欠这么多老百姓的债务,到底是怎么回事呢?
事情还得从十年前说起――
1992年春,为了大力发展乡镇企业,胡丙申被县委寄予厚望,从民政局长的位置上调任县乡镇企业局局长。上任后,胡丙申了解到好多企业因为缺少流动资金已陷于瘫痪和停产,要想盘活现有企业,必须帮他们解决流动资金问题。
随后,胡丙申做通了县农村信用社的工作,为符合放贷条件的企业争取到了一定额度的贷款,有一部分企业其他条件都过关,就是找不到担保人,胡丙申毫不犹豫地在贷款担保书上签上了自己的名字。
就在这时,许多不具备贷款条件的企业也先后找到胡丙申,恳求他利用自己的人际关系,寻求民间资本支持。于是,胡丙申走访老干部、建筑商,甚至是个体摊贩和早期致富的农民,希望他们拿出闲置的资金,有偿支持乡镇企业的发展。凭着他在群众中的威信,短短数天就筹借了69万元,为夏县中草药加工厂、四辛庄肉联厂、禹王童装厂等乡镇企业解了燃眉之急。不用说,胡丙申也成了所有民间借贷的担保人。
胡丙申没有考虑到的是,早期乡镇企业都是自发的,带有很大盲目性。没过多久,一些企业就因产品质量不过关或经营管理混乱等原因,纷纷关门破了产,企业主们纷纷逃往外地躲债。此时,借贷矛盾已经显现出来,只不过当时胡丙申还在位,大家隐忍不发,没有把矛盾激化。当胡丙申内退的消息不胫而走后,当年由他经手担保借贷的债主们纷纷涌上门来,找他讨债……
一连好几天,胡家小院里人声鼎沸,到了晚上,还有人坐着不走,硬要胡丙申给个说法。有的人甚至恶语相加,胡丙申只能赔着笑脸,说给他些时间,让他想想办法。
更大的压力来自于家庭内部,家人当初对胡丙申给人借款担保的事就有看法,事情的结局恰恰印证了家人的担心,就连一向温和的老伴也忍不住数落丈夫:“你瞅瞅,你都干的什么傻事啊!”
面对家人白天晚上的轮番质询,胡丙申始终沉默不语。他压根没有想到会出现如此难堪的局面,一向以正直、清廉闻名的大丈夫形象,突然间声名狼藉,让他的自尊心受到了极大伤害。
那几天,面对债主无休止地上门讨债、儿女们的抱怨和指责,胡丙申几次来到黄河大桥,对着滔滔黄河水,诉说自己的委屈。有时,他只想纵身一跳,一了百了。可转念一想,债因自己而起,我不能愧对曾经相信我的人,不能愧对我的亲人,尤其不能带着骂名离开人世。
接下来,胡丙申选择了主动出击,他带着债主去找当年的借钱人,让债务人拟定还款计划。可接连半个多月跑下来,除了夏县植物激素厂等极少数企业签订还款计划并如约履行外,大多数借款企业都已破产、倒闭,当初的企业主们有的亡故,有的不知踪影。于是,这些债款都落在了胡丙申身上。
无奈,胡丙申和老伴戴上老花镜,把所有的债务清单进行了整理,核对了多次,“39万元”的天文数字惊呆了老两口。缓过神后,胡丙申下定了决心:债因我而起,再多的钱也得还!
人急则无智。胡丙申到乡下老家清静了几天,拿出了周密的还债计划。在信用社担保的贷款,本金用自己的工资扣还,利息则由自己按季度支付,这样最终连本带息还清,约需12年时间,如果赶上退休工资调高,还款日期还会缩短。
2001年元月下旬,胡丙申分组召集债主座谈,确定所有民间借贷利息截止到当天,连本带息由他在15年内陆续归还,希望取得大家的谅解。只是,债主们一致商议,最后把还款期限缩短到10年,胡丙申答应了。
胡丙申替人背债39万元的消息很快传出,在这个不大的县城成了特大新闻。有人说他憨,也有人说他好。对大家的议论,胡丙申坦然地说:“我活着是个人,倒了还得爬起来,再怎么难,也不能失去信用!”
写春联、开饭馆、学理发,
退休局长携妻艰辛挣钱还债
2002年2月4号,农历腊月二十三。山西夏县县城街头,一位头发半白的老者坐在长条桌后面,桌子前面摆着“春联”的招牌,他的老伴在旁边帮着招揽生意。有顾客过来,老人就根据客人的要求,自编自写,来求春联者络绎不绝。有熟悉的人从摊位前走过,惊呼起来:“这不是老胡吗?怎么在街头卖起字来了!”
不错,这位被人称作“老胡”的长者正是胡丙申,写春联卖字是他为还债迈出的第一步。随后,“老局长卖字还债”的消息传了出去,当年胡丙申曾任乡党委书记的禹王、胡张、裴介三个乡镇的村民们,感念胡丙申当年的功德,来县城办事的时候,也不忘过来让老书记写几副春联带回家。
这样一来,胡丙申的春联生意十分火爆。直到大年三十,无论刮风下雪,他都坚持出摊。腊月二十八那天,冷风如刀,天空飘起了雪花。老伴劝他不要去写了,胡丙申说:“乡亲们进城路途远,万一来了求不到春联怎么办?”老伴只好带上塑料布又陪着他出去守摊。中午吃饭时,胡丙申也不肯回家,王金梅只好用毛巾裹着饭盒,送来热腾腾的饭菜。
经过好心人指点,胡丙申用写春联赚的钱批发了些花炮,让老伴负责卖炮。一时,老两口春联、花炮同时经营,获利颇丰,短短几天居然赚了2000元,初战告捷让胡丙申还债信心大增。
2002年春节刚过,胡丙申便在县城找了家小店面,开起了饭馆,昔日的一局之长成了大厨,老伴则是采购员、收银员、服务员一肩挑。饭馆虽小,杂事颇多。每天天不亮,老两口就爬起来和面烧水,收拾停当还要赶早市买菜,夜里十来点钟打烊后打扫卫生,最后,还要强撑着盘点一天的收支。
为了省钱,胡丙申都是自己借辆架子车去运煤。老伴怕他体力不支,要雇小工,他笑呵呵地说,这比当年我带领村民铺沙盖碱轻松多了。运煤时,认识他的人不解地问:“胡局长,你怎么亲自拉煤啊?”胡丙申笑着反问道:“我为什么就不能亲自拉煤呢?”
虽然开着饭店,胡丙申总是舍不得吃,经常是垒个馒头,上面撒些盐和辣椒面就算是一顿饭。每当看到丈夫省吃俭用,老伴就流着泪劝他:“咱怎么省都行,千万不要在嘴里省。你的身体垮了,这一家老小可指望谁呀!”胡丙申总是笑着安慰老伴:“没事儿,当年我这身体打下的老底子硬着哩!”
两年饭馆开下来,不但钱没挣多少,胡丙申和老伴却累瘦了一圈。儿女们心疼父母,不让他们再开下去了,并决定凑钱帮父亲还债,却被胡丙申固执地拒绝了。
其实,胡丙申一直觉得对儿女们心里有愧。他当局长多年,大儿子参军提干是自己奋斗的,跟他没任何关系,女儿至今仍是农村户口,老伴曾经想让他给女儿安排个工作上班,却被他以“不能带头搞不正之风”顶了回去。二儿子当兵复员回来时,胡丙申还是民政局局长,按说为城镇复员兵安置工作是国家政策允许范围内的事,给二儿子安置工作也顺理成章。老伴提出此事后,不料又被他顶了回来,他认为自己身为民政局长,会有利用职权带头为亲属安排工作的嫌疑。儿女们从没有沾过他这个当官的爹什么光,凭什么要跟着他受累?
2004年3月,胡丙申关闭了饭馆,在县城西关租了间门面,开起了理发店。因为店面小,理发师不愿到他这里屈就,胡丙申就拿起理发工具边学边=F,由于理发技术不过硬,顾客也很少问津。一年到头,胡丙申赚来的钱除了缴房租之外,几乎剩不下钱来。
2005年春节后,胡丙申将理发店关停,转而经营起了百货小超市,大到面粉、调和油,小到针头线脑,经营种类应有尽有。胡丙申让老伴守店,他天天骑着三轮车巡回于县城几家较大的批发部进货。为了节省每一分钱,出门他都是杯子里灌些白开水,从不舍得买瓶矿泉水,饿了就吃随身带的大饼。
遇到进货量大的时候,为了低几分钱的进价,胡。丙申就骑着摩托车到运城市批发市场进货,早出晚归,一去就是一天,在外面不舍得吃饭,回到家吃饭后还得硬撑着身子点货摆货。
2005年冬天的一个傍晚,胡丙申从运城进货回来,老伴看到他脸色苍白,疲惫不堪,赶庀把他扶到床上,就要去请大夫。胡丙申虚弱地摆摆手说: “不碍事,休息会儿就好。白天在运城进货时,我突然感到眼前一黑,天旋地转,我扶着电杆喘了一会儿就好了!”
王金梅用热毛巾擦着老伴的脸,有些后怕地说:“多危险啊,身边又没有亲人。咱们休息几天,到医院检查一下吧!”胡丙申开玩笑地说: “估计是‘脑血栓’找我来了,一看我还有这么多债要还,就高抬贵手把我放了。”
王金梅被老伴逗乐了,继而又心酸地流起了泪。
“信义”二字何止千金!
老夫妻打工十年终偿巨债
2006年,受朋友之邀,胡丙申到运城参与《五千年文明河东人系列丛书》的编撰工作。这份工作不仅能让胡丙申发挥自己的写作特长,也有了一份稳定的收入。更让他欣喜的是,自己的退休工资也从退休时的六七百元调高到2000多元,从此,胡丙申的“还债”计划驶入了“快车道”。
老伴被邀至运城编书后,王金梅并没有闲着。秋收时期,她瞒着家人悄悄回到冯村老家,今天给东家摘棉花,明天给西家挖红薯,甚至连拆房、砌墙的活儿她也抢着干,为的就是一天能赚到20元的辛苦费。
好事的乡亲把王金梅的行动告诉了她的儿女们,孩子们怕母亲累坏了,强行到乡下把母亲“请了回来”。王金梅闲不住,又来到运城,在劳务市场找了份给人当保姆的活儿,每月能挣500元的工资。
值得一提的是,凭着日积月累吃苦受罪打零工,王金梅十年间给老伴挣了2万多元的还债钱。这个善良而又传统的中国女性,用行动诠释着相濡以沫、患难与共的夫妻情。
自从参与丛书的编写后,“胡丙申充分发挥了自己的人脉关系和写作特长,超额完成采编任务,并享受到一份不菲的奖金。多年打工还债经历,让胡丙申对世事、人生有了更为深刻的感悟。编辑丛书期间,他晚上坚持写作,文章不断发表在《河东文学》、《运城日报》、《黄河晨报》等报刊上,仅《夏县人》一家杂志10年间就刊发了胡丙申诗歌、散文、杂文等近百篇文章,他也是在用这种方式告诉债权人:“我胡丙申还活着,请大家放心。”
2009年12月,信用社打电话让胡丙申来取他的工资本,告诉他信用社的贷款已从工资本上扣完。听到这个好消息,胡丙申顿时精神一振。在信用社取工资本时,他受到了全体工作人员的热情接待。信用社主任握着他的手说:“如果贷款人都能像你这样,我们的工作就好做了。”
让胡丙申更欣慰的是,信用社贷款还清的同时,其他债务也已基本还清。2010年岁尾,经过十年的卧薪尝胆,胡丙申终于赶在年终最后一天还上了最后一笔“债务”。当他把两摞崭新的百元大钞递到对方手中时,债权人感动得说不出话来。胡丙申感到了一种前所未有的轻松。
2011年元旦这一天,胡丙申10年来破天荒地拉着老伴上街买衣服,享受着无债一身轻的感觉。老伴说,应该给你先买,你的棉衣和外罩从里到外都是补丁。
的确,十年间,胡丙申没有给自己添过一件新衣服,棉衣、棉裤可说是补丁上摞着补丁。孩子们买的新衣服他也不穿,他说这叫卧薪尝胆。不但如此,他抽烟也从最初的五块钱“红河”,降到两块五的“哈德门”。胡丙申还自我解嘲说:“鲁迅最爱抽‘哈德门,我特别崇拜鲁迅。”
那天逛完街回到家,胡丙申把老伴让到沙发上,用一种欣赏的眼光久久看着她。王金梅嗔怪他说:“你这是咋啦?不认识我了!胡丙申没说话,轻轻打开眼镜盒,取出一张两万元的定期存单交到老伴手里。
王金梅看着存单一头雾水。胡丙申深情地说:“老伴啊,这10年你跟着我受苦了,我怕我撑不下来,半道上走了,还债的同时悄悄存了两万元,想给你留个保命钱。”王金梅感动得热泪盈眶。原来,胡丙申连最坏的结果都想到了,而在那样的压力下,他心里依然牵挂着妻子,王金梅抱着丈夫失声痛哭。
胡丙申轻声安慰老伴说:“过去了,一切都过去了,我们老两口也要开始新的生活。工资本在咱们手上,钱怎么花全听你的。”王金梅破涕为笑道:“咱俩每年旅游一个地方,争取跑遍全中国。”胡丙申补充道:“跑遍全世界。”
看着胡丙申孩子似的神情,王金梅欣慰极了。当年,她出生于一个富商家庭,在“唯成分论”的那个时代,25岁已当上村支部书记的胡丙申冒着政治前程受影响的压力,毅然和她结了婚。老两口相濡以沫地过了大半生,老伴有难,她不帮他谁帮他啊!